[发明专利]一种分析注射用硫酸核糖霉素含量及有关物质的高效液相色谱－脉冲安培检测器法

说明书

本发明公开了一种分析注射用硫酸核糖霉素含量及有关物质的高效液相色谱‑脉冲安培检测器法，该方法主要应用高效液相色谱‑脉冲安培检测器法对注射用硫酸核糖霉素含量进行测定，对其有关物质进行检查。该方法所用流动相组成简单、对仪器损害小，对有关物质杂质检出灵敏度高，精密度高，含量测定结果准确，重复性和回收率良好。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种注射用硫酸核糖霉素的质量控制方法，尤其涉及一种注射用硫酸核糖霉素的含量测定及有关物质检查方法。

背景技术

硫酸核糖霉素(Ribostamycin Sulfate)是日本明治制果株式会社于上世纪70年代研究开发的一种新型氨基糖苷类广谱抗生素，商品名为维斯他霉素。1975年，中国科学院抗菌素研究所从广东土壤中分离出一株核糖苷链霉菌(链霉菌3719)，并进行了菌种分类鉴定、化学分离与鉴别、发酵与提炼工艺、诱变育种、体内外活性及临床前药理等一系列实验研究工作。1980年抗菌素所将诱变菌种D-318交予大连制药厂和上海第四制药厂，共同协作完成了注射用硫酸核糖霉素临床样品的制备及工艺试制研究并与1984年上市。

硫酸核糖霉素是核糖苷链霉菌产生的氨基糖苷类广谱抗生素，对革兰氏阳性、阴性菌均有抑制作用，对大肠杆菌属、变形杆菌属、沙门氏菌属、肺炎杆菌和痢疾杆菌等革兰氏阴性杆菌以及金葡菌较敏感，对结核杆菌具有一定敏感性，对绿脓杆菌和厌氧菌无效。用于各种呼吸道感染、尿路感染、腹腔感染、眼、耳、鼻、喉科及皮肤组织感染等，严重感染可与半合成青霉素、头孢菌素联合应用。同其他氨基糖苷类抗生素一样具有抗菌谱广和抗菌作用强的优点，此外，硫酸核糖霉素是内耳毒性和肾毒性较小的氨糖类抗生素之一。

由于硫酸核糖霉素无紫外吸收，现行各国药典[中国药典(ChP2015)、日本药典17(JP17)、韩国药典10(KP10)]均采用抗生素微生物检定法测定硫酸核糖霉素的含量。该方法虽是经典的生物效价测定方法，但操作复杂，影响因素众多，检验时间较长，不利于企业进行产品质量的中间控制和监管部门的对产品质量的快速监测。

因为硫酸核糖霉素无紫外吸收且其极性极强，所以ChP2015采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)对其进行有关物质检测。虽然比JP17和KP10的薄层色谱法专属性强、灵敏度高，但是检测用流动相[取七氟丁酸酐45.1g，置1000ml量瓶中，加乙腈-四氢呋喃-水(10∶5∶85)]所需试剂价格昂贵(每升流动相成本达2000元人民币)，且具有强腐蚀性，对仪器、色谱柱及实验人员均严重伤害，同时存在色谱条件优化空间小，浓度与峰面积呈对数线性计算较为复杂，灵敏度较低等问题。

高效液相色谱脉冲安培检测器法(HPLC-PAD)，其原理是在两电极之间施加一恒定电位，当电活性组分经过电极表面时发生氧化还原反应(电极反应)，电量(Q)的大小符合法拉第定律，该方法具有灵敏度高、重复性好、线性范围宽、色谱条件优化空间大等优点，尤其对于无紫外吸收且具电活性的化合物可直接测定，目前HPLC-PAD法已被广泛应用于食品分析、药物分析等领域。[(李仁勇，梁立娜，牟世芬.高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测食品中糖的应用进展[J].食品与发酵工业，2010，36(7)：97-101.)、(赵卫，陈达，赵述强，等.反相高效液相色谱-脉冲安培法测定硫酸奈替米星注射液的有关物质[J].中国药学杂志，2015，52(20)：1805-1811.]

为了适应新形势对产品质量分析方法的新要求和有效保证硫酸核糖霉素及其制剂研发和生产的质量，需要改善现行方法的不足。因此，研究获得一种快速、准确、廉价和安全的分析注射用硫酸核糖霉素含量及有关物质的方法，对医药生产企业和监管部门均显得尤为迫切和重要。

发明内容