[发明专利]双[2;4;6-三氯苯基]草酸酯在测定链格孢霉毒素中的应用及方法

说明书

本发明涉及一种双[2,4,6‑三氯苯基]草酸酯在测定链格孢霉毒素中的应用及方法，本发明采用酶联免疫分析法，利用辣根过氧化物酶催化过氧化脲氧化3‑(4‑羟苯基)丙酸，生成能发荧光的3‑(4‑羟苯基)丙酸二聚体，进而在乙腈介质中，在增强剂咪唑的参与下，同双[2,4,6‑三氯苯基]草酸酯和过氧化脲反应产生强化学发光，建立了一种简单、快速、高灵敏度的测定细交链格孢菌毒素的化学发光间接竞争免疫分析方法；该方法的半抑制浓度IC50为95.2ng/L，在12.21～1562.50ng/L范围内成良好的线性关系，最低检出限LOD为2.53ng/L，能够用于链格孢霉毒素检测。

技术领域

本发明属于生物检测领域，涉及双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯在测定链格孢霉毒素中的应用，还涉及双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯测定链格孢霉毒素的方法。

背景技术

链格孢霉(Alternaria)是半知菌暗色丝孢菌中重要的一类真菌，能产生70余种真菌毒素和植物毒素，称为链格孢毒素，其中细交链孢菌酮酸(TA)是唯一被美国列入有毒化学物质登记册中的链格孢毒素，TA是链格孢霉中最为重要的毒素之一，可广泛污染蔬菜、水果及谷物。虽然能产生该毒素的链格孢菌株检出率低，但产毒能力很强，其毒素水平居各种链格孢毒素之首。TA能与其它真菌毒素协同作用，产生急性毒性。由于TA在大量商业产品中都被发现，例如谷物、果汁、西红柿产品、啤酒和胡萝卜，欧洲食品安全机构(EFSA)已经公布了这些毒素的最高限量标准，而我国目前由于对此类毒素研究较少，目前没有相关的限量法规。因此，发展一种高灵敏、快速和特异的方法来实现对TA的定量检测是十分必要的。

目前针对TA的精测方法主要有气-液色谱法(GLC)、气相色谱法(GC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)等，此类方法测量结果准确度高、稳定性好，但通常需要大型的实验仪器和复杂的前处理过程，不适用于现场检测。酶联免疫分析法在检测TA中有很多优点，包括高选择性和特异性和使用不含放射性试剂。钟红等建立的TA残留检测间接竞争ELISA方法，最低检出限为0.02ng/mL，检测范围0.06-35.95ng/mL。马良等建立的基于鲁米诺体系的TA残留检测化学发光酶联免疫方法，最低检出限为0.01ng/mL，检测范围0.032-30.244ng/mL。此类方法不需要大型设备和严格的实验室条件，研制出的试剂盒使用方便快捷，可实现高通量的现场速测。

过氧草酸酯类化学发光体系是一类高效的新型化学发光体系，这种体系除了具有发光效率高，强度大，寿命长的特点外，同时还可以通过成分选择和调节，使发光强度、持续时间和颜色满足特殊需要。在各种草酸酯类试剂中，双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯(TCPO)相比之下最为稳定，所以应用更为广泛一些。目前，以TCPO-H2O2-荧光物质化学发光体系为手段的检测方法有少量报道，主要集中在兽药残留、抗生素、葡萄球菌肠毒素C1、胆固醇、生物胺以及其他化学成分的检测，而在真菌毒素检测方面尚无相关研究。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯在测定链格孢霉毒素中的应用；本发明的目的之二在于提供基于双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯检测链格孢霉毒素的方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯在测定链格孢霉毒素中的应用。

优选的，所述测定使用化学发光酶联免疫分析法。

优选的，所述化学发光是基于双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯─H2O2─3-(4-羟苯基)丙酸二聚体化学发光体系。