[发明专利]双[2;4;6-三氯苯基]草酸酯在测定链格孢霉毒素中的应用及方法在审

专利信息
申请号: 201711331141.1 申请日: 2017-12-13
公开(公告)号: CN108088838A 公开(公告)日: 2018-05-29
发明(设计)人: 马良;潘姝历;张宇昊 申请(专利权)人: 西南大学
主分类号: G01N21/76 分类号: G01N21/76;G01N33/577;G01N33/535
代理公司: 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 代理人: 赵荣之
地址: 400715*** 国省代码: 重庆;50
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摘要:
搜索关键词: 草酸酯 链格孢 三氯苯 过氧化脲 羟苯基 毒素 丙酸 辣根过氧化物酶催化 酶联免疫分析法 间接竞争免疫 毒素检测 高灵敏度 化学发光 线性关系 孢菌毒素 二聚体 检出限 增强剂 荧光 交链 乙腈 咪唑 应用 发光 分析
【权利要求书】:

1.双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯在测定链格孢霉毒素中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述测定使用化学发光酶联免疫分析法。

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:所述化学发光是基于双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯─H2O2─3-(4-羟苯基)丙酸二聚体化学发光体系。

4.基于双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯检测链格孢霉毒素的方法,其特征在于,包括如下步骤:在酶标板中包被链格孢霉毒素抗原,封闭后用抗细交链格孢菌酮酸单克隆抗体竞争,然后加入酶标二抗孵育,加入过氧化脲与3-(4-羟苯基)丙酸混合液酶催化反应后,转移至另一白色酶标板中,加入含咪唑的过氧化脲,混匀后加入双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯乙腈溶液显色,酶标仪检测。

5.根据权利要求4所述基于双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯检测链格孢霉毒素的方法,其特征在于:所述包被为将浓度为0.25~1.0μg/mL的BSA修饰链格孢霉毒素加入酶标板中,4℃过夜。

6.根据权利要求4所述基于双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯检测链格孢霉毒素的方法,其特征在于:所述封闭为将脱脂奶粉溶液于37℃温育1h;甩板后在滤纸上拍干,PBST洗板2次,每次3min,所述脱脂奶粉溶液为每1.0g脱脂奶粉溶于20mL PBST的溶液。

7.根据权利要求4所述基于双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯检测链格孢霉毒素的方法,其特征在于:加入浓度为0.05~0.25μg/mL的抗细交链格孢菌酮酸单克隆抗体,温育;甩板后在滤纸上拍干,PBST洗板2次,每次至少3min。

8.根据权利要求4所述基于双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯检测链格孢霉毒素的方法,其特征在于:所述酶标二抗孵育为将HRP标记的羊抗鼠抗体稀释2000~8000倍,温育,甩板后在滤纸上拍干,PBST洗板5次,每次至少3min。

9.根据权利要求4所述基于双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯检测链格孢霉毒素的方法,其特征在于:所述酶催化反应为将过氧化脲与3-(4-羟苯基)丙酸混合,控制pH值为6.0,温育5~30min;混合后所述过氧化脲浓度为4.0×10-3~12×10-3mol/L;所述3-(4-羟苯基)丙酸浓度为5×10-3~11×10-3mol/L。

10.根据权利要求4所述基于双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯检测链格孢霉毒素的方法,其特征在于:加入含咪唑的过氧化脲溶液,溶液中过氧化脲浓度为1~4mol/L,所述咪唑浓度为2×10-3mol/L,混匀后加入浓度为1~4×10-3mol/L的双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯乙腈溶液。

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