[发明专利]重组蛋白质及其制造方法与应用

说明书

一种重组蛋白质及其制造方法与应用。重组蛋白质包括肽，且此肽包括对序列辨识号：1的序列进行置换后的氨基酸序列，而所指置换包括由下列置换所组成的群组的至少一者：所述序列辨识号：1的第182位的氨基酸被置换为天门冬氨酸(Asp)；所述序列辨识号：1的第268位的氨基酸被置换为天门冬氨酸(Asp)；以及所述序列辨识号：1的第384位的氨基酸被置换为酪氨酸(Tyr)。上述重组蛋白质可适用于检测糖化血红蛋白。上述重组蛋白质可具有较高的热稳定性与基质特异性。

技术领域

本发明是关于一种重组蛋白质及其制造方法与应用，特别是关于一种适用于检测糖化血红蛋白的重组蛋白质。

背景技术

对糖尿病患者而言，血糖的治疗或控制效果的评估是以糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,HbA1c)作为最佳的检测标的，且以酶法(酵素法，Enzyme method)作为常规的临床检测方法。酶法的检测原理是以果糖基氨基酸氧化酶(fructosyl amino acidoxidase,FAOD)的糖解作用作为基础，其中以FAOD作为主要反应酶，而以果糖基缬氨酸(fructosyl valine,F-V)与果糖基缬氨酰基组氨酸(fructosyl valyl histidine,F-VH)作为反应基质，藉以进行糖化血红蛋白的测定。

因此，在利用酶法所进行的糖化血红蛋白检测中，作为主要反应酶的果糖基氨基酸氧化酶的基质特异性(substrate specificity)成为关键因素。然而，在糖化血红蛋白被蛋白酶水解的过程中，除了产生F-V与F-VH之外，也会相对产生大量的果糖基赖氨酸(fructosyl lysine,F-K)，而目前市场上所提供的FAOD对于F-K仍具有一定的亲和性(affinity)，导致糖化血红蛋白的检测受到干扰。

此外，目前市面上用以检测糖化血红蛋白的检测试剂盒中，其果糖基氨基酸氧化酶的热稳定性并不理想，多在试剂盒中添加大量稳定剂来提高稳定性，然而诊断试剂需要一定的保存时间，因而对稳定性有较高的要求，且所加入的稳定剂常导致试剂粘度提高而影响后续的检测。

因此，目前亟需一种具有高基质特异性及热稳定性的果糖基氨基酸氧化酶，以达到既可精准定量糖化血红蛋白并能长期稳定保存的目的。

发明内容

本发明提供一种重组蛋白质，可具有较高的热稳定性与基质特异性。

本发明另提供一种重组蛋白质的制备方法，以制备上述的重组蛋白质。

本发明另提供一种用于检测糖化血红蛋白的检测试剂盒，具有可精准定量糖化血红蛋白以及长期稳定保存的优点。

本发明提供一种重组蛋白质，其包括肽。此肽包括对序列辨识号：1的序列进行置换(substitution)后的氨基酸序列。前述置换可包括由下列置换所组成的群组中的至少一者：序列辨识号：1的第182位的氨基酸被置换为天门冬氨酸(Asp)、序列辨识号：1的第268位的氨基酸被置换为天门冬氨酸(Asp)、以及序列辨识号：1的第384位的氨基酸被置换为酪氨酸(Tyr)。

在本发明的一实施例中，上述置换可包括由下列置换所组成的群组中的至少一者：序列辨识号：1的第182位的氨基酸由甘氨酸(Gly)置换为天门冬氨酸(Asp)(Gly182Asp)、序列辨识号：1的第268位的氨基酸由天门冬酰胺(Asn)置换为天门冬氨酸(Asp)(Asn268Asp)、以及序列辨识号：1的第384位的氨基酸由组氨酸(His)置换为酪氨酸(Tyr)(His384Tyr)。

在本发明的一实施例中，上述肽的氨基酸序列可包括序列辨识号：2的序列。

在本发明的一实施例中，上述肽的氨基酸序列可包括序列辨识号：3的序列。

在本发明的一实施例中，上述肽的氨基酸序列可包括序列辨识号：4的序列。