[发明专利]一种适应PK-15全悬浮生长的无血清培养基及其制备方法和应用于PK-15细胞的全悬浮驯化方法

权利要求书

1.一种适应PK-15全悬浮生长的无血清培养基，其特征在于由如下组分制备而成：

2.根据权利要求1所述适应PK-15全悬浮生长的无血清培养基，其特征在于由如下组分制备而成：

3.一种权利要求1所述适应PK-15全悬浮生长的无血清培养基的制备方法，其特征在于：将1～10mg吐温80溶解于50毫升注射用水中，然后加入0.15-0.5mg亚油酸、0.2-2mg维生素E、0.2-0.8mg豆蔻酸、0.18-0.5mg硬脂酸、5-50mg维生素A，待其溶解充分，用注射用水补液至500毫升，再向其中加入1-20mgβ-巯基乙醇、2-8g氯化钠、8-15g葡萄糖，搅拌至澄清，用注射用水补液至900毫升，然后加入：

添加完毕后，继续搅拌至完全溶解，再用注射用水补液至1000mL，经过滤、除菌后于4℃避光保存。

4.根据权利要求3所述适应PK-15全悬浮生长的无血清培养基的制备方法，其特征在于各组分配比如下：

5.利用权利要求1或2所述的适应PK-15全悬浮生长的无血清培养基驯化PK-15细胞全悬浮的方法，其特征在于以PK-15贴壁细胞为基础，将PK-15细胞用胰酶消化后以所述培养基重悬，将重悬后的细胞以1×10⁶cells/mL-5×10⁶cells/mL的密度接种至125ml摇瓶，再加入所述培养基至少30ml，之后将药瓶放于含5％CO₂的恒温摇床上培养，培养温度为37℃，摇床转速为100-130rpm；每24h取样用细胞计数仪测定细胞密度及活率，并用倒置显微镜观察细胞状态，且每48h更换所述培养基，直到PK-15细胞适应悬浮生长。