[发明专利]以TIPE2基因为靶点的肿瘤MDSC在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用

权利要求书

1.以TIPE2基因为靶点的肿瘤MDSC在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用；所述以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于；所述应用包括基于所述肿瘤MDSC进行细胞免疫疗法预防或治疗肿瘤。

3.以TIPE2基因为靶点在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用；所述以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达。

4.一种TIPE2基因敲除的肿瘤MDSC。

5.根据权利要求4所述的TIPE2基因敲除的肿瘤MDSC的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

采用皮下注射方式给TIPE2基因缺失的小鼠进行肿瘤细胞种植；

待种植的肿瘤细胞生长为肿瘤组织块后，从小鼠身上取下肿瘤组织块，采用酶混合液对肿瘤组织块进行消化，所述酶混合液包括胶原酶I、胶原酶IV、透明质酸酶和脱氧核糖核酸酶；

消化完成后采用完全培养基终止消化，将肿瘤组织块置于细胞筛网上研磨，收集通过细胞筛网的组织研磨液；

对所述组织研磨液进行4℃低速离心，获取细胞上清液，弃沉淀杂质；对细胞上清液进行4℃高速离心，收集沉淀细胞；

将收集的沉淀细胞用RPMI 1640完全培养基重悬，采用小鼠肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞分离液试剂盒对收集的沉淀细胞进行分离，具体的，将细胞的RPMI 1640完全培养基重悬液加入按照试剂盒配制的分离液液面上，1260g、25℃离心后，用吸管吸取并收集离心管中出现的两层环状的乳白色细胞层；

采用PBS溶液洗涤所收集的乳白色细胞层，1260g，4℃离心，弃上清，再采用PBS重悬，获得PBS细胞悬液；

采用流式抗体CD45/CD11b/Gr-1在4℃下，对PBS细胞悬液进行染色，并采用流式细胞仪分选CD45⁺CD11b⁺Gr-1⁺细胞，即获得TIPE2基因敲除的肿瘤MDSC。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述酶混合液中含有50mg/mL的胶原酶I、50mg/mL的胶原酶IV、5mg/mL的透明质酸酶和1U/mL的脱氧核糖核酸酶。

7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：所述肿瘤细胞种植中，采用的肿瘤细胞为LLC小鼠肺癌细胞。

8.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：所述肿瘤细胞种植中，种植肿瘤细胞的量为每只小鼠2×10⁶个肿瘤细胞。

9.根据权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于：所述从小鼠身上取下肿瘤组织块，具体包括，将脱颈处死的小鼠浸泡于75％酒精中，随后将小鼠放置于无菌超净台上，用手术剪刀和镊子取下肿瘤组织块。

10.根据权利要求4所述的TIPE2基因敲除的肿瘤MDSC在制备预防或治疗肿瘤的药物中的应用。