[发明专利]一种破伤风类毒素的精制方法

说明书

本发明提供一种破伤风类毒素的精制方法，其包括准备待纯化的破伤风类毒素原液；将破伤风类毒素原液加样于EMD DEAE(M)凝胶层析柱；采用平衡液对加样后的层析柱进行平衡，平衡后，采用洗脱液I洗脱所需的破伤风类毒素单体，收集含破伤风类毒素单体的洗脱液。本发明精制方法显著提高破伤风类毒素单体纯度，且其收率达40％以上，该方法获得的破伤风类毒素单体作为结合疫苗的载体蛋白能显著提高疫苗的免疫原性，为多糖‑蛋白质结合疫苗及其他以TT为联合疫苗组分的疫苗提供了更加安全有效的蛋白质。

技术领域

本发明属于破伤风类毒素制备领域，涉及一种破伤风类毒素的精制方法。

背景技术

破伤风类毒素(tetanus toxoid，TT或TTd)作为单价或吸附百白破疫苗的主要成分已广泛应用于婴幼儿及适宜人群的预防接种，随着目前国内外细菌性结合疫苗的迅速发展，b型流感嗜血杆菌结合疫苗、脑膜炎球菌结合疫苗、肺炎球菌结合疫苗已有TT作为载体蛋白质的疫苗成功上市(Tontini M，Berti F，Romano MR，et al.Comparison of CRM197，diphtheria toxoid and tetanus toxoid as protein carriers for meningococcalglycoconjugate vaccines[J].Vaccine，2013，31(42)：4827-4833.WHO.Recommendationsto assure the quality，safety and efficacy of pneumococcal conjugate vaccines[S].Geneva，19to 23October 2009.)，其安全性已得到长期临床试验证实(Centers forDisease Control and Prevention(CDC).Updated recommendations for use oftetanus toxoid，reduced diphtheria toxoid and acellular pertussis(Tdap)vaccinefrom the Advisory Committee on Immunization Practices，2010[J].MMWR MortalWkly Rep，2011，60(1)：13-15.Vesikari T，Wysocki J，Chevallier B，etal.Immunogenicity of the 10-valent pneumococcal non-typeable Haemophilusinfluenza protein D conjugate vaccine(PHiD-CV)compared to the licensed 7vCRMvaccine[J].Pediatric Infect Dis J，2009，28(4Suppl)：S66-S76.)。由于TT作为疫苗抗原使用途径不同，其质量控制指标也有所差异，如作为破伤风的TT抗原应使用大分子TT，而作为结合疫苗的载体蛋白质应以相对分子质量相对较小的TT单体含量高的纯化蛋白为首选(Vesikari T，Wysocki J，Chevallier B，et al.Immunogenicity of the 10-valentpneumococcal non-typeable Haemophilus influenza protein D conjugate vaccine(PHiD-CV)compared to the licensed 7vCRM vaccine[J].Pediatric Infect Dis J，2009，28(4Suppl)：S66-S76.