[发明专利]一种破伤风类毒素的精制方法

权利要求书

1.一种破伤风类毒素的精制方法，其包括如下步骤：

(1)准备待纯化的破伤风类毒素原液，并调节其pH为6.0～8.0，电导不大于10ms/cm；

(2)将步骤(1)的破伤风类毒素原液加样于以EMD DEAE(M)为填料的凝胶层析柱；

(3)采用平衡液对加样后的层析柱进行平衡，平衡后，采用洗脱液I洗脱所需的破伤风类毒素单体，收集破伤风类毒素单体的洗脱峰；

优选地，步骤(3)中洗脱液I的流速为30～75cm/h；

优选地，步骤(3)中采用纯化仪进行洗脱；更优选地，设置该纯化仪的监测波长为206～300nm。

2.根据权利要求1所述的破伤风类毒素的精制方法，其中，所述凝胶层析柱为EMD DEAE(M)凝胶预装柱形式；优选地，该凝胶预装柱的内径例如为不小于5mm，高度为不小于50mm，柱体积为不小于1ml；例如8mm ID×100mm H，V＝5.0ml的凝胶预装柱。

3.根据权利要求1所述的破伤风类毒素的精制方法，其中，所述洗脱液I为含磷酸盐浓度为10～35mmol/L，氯化钠浓度为60～130mmol/L且pH为6.0～8.0的缓冲水溶液。

4.根据权利要求1所述的破伤风类毒素的精制方法，其中，在待纯化的破伤风类毒素原液中，其单体含量为70～85％；更优选地，在该原液中，二聚体含量为13～25％，多聚体含量为2.6～3.2％，余量为其他杂质。

5.根据权利要求1所述的破伤风类毒素的精制方法，其中，步骤(1)中采用平衡液对待纯化的破伤风类毒素原液进行稀释调节，步骤(2)是将稀释调节后的破伤风类毒素原液加样于所述层析柱；例如采用体积与待纯化的破伤风类毒素原液体积相同的平衡液进行稀释，使其pH为6.0～8.0，电导不大于10ms/cm。

6.根据权利要求1所述的破伤风类毒素的精制方法，其中，所述平衡液为含磷酸盐浓度为10～35mmol/L且pH为6.0～8.0的缓冲水溶液。

7.根据权利要求1所述的破伤风类毒素的精制方法，其中，待收集完破伤风类毒素单体的洗脱峰后，采用洗脱液II洗脱其余杂蛋白；优选地，所述洗脱液II为含磷酸盐浓度为10～35mmol/L，氯化钠浓度为500～1000mmol/L且pH为6.0～8.0的缓冲水溶液。