[发明专利]一种使用固定化脂肪酶富集藻油中的GLA的方法

说明书

本发明涉及一种脂肪酶富集藻油中的GLA的方法，包括以下步骤：S1：将脂肪酶固定化，得到固定化脂肪酶；S2：配制脂肪酶‑藻油反应体系，所述脂肪酶‑藻油反应体系中包含藻油、水、固定化脂肪酶和0.5‑2mM的抗坏血酸，使所述脂肪酶‑藻油反应体系反应8‑12h；S3：使用有机溶剂从反应后的所述脂肪酶‑藻油反应体系中萃取有机相，即得到GLA富集化的藻油。使用本发明的方法使用固定化脂肪酶即可大大提高藻油中的GLA浓度，达到富集的效果。

技术领域

本发明涉及微藻组分提取领域，更特别地，涉及一种使用固定化脂肪酶富集藻油中的GLA的方法。

背景技术

γ-亚麻酸(gamma linolenic acid，GLA)，属于n-6系列多不饱和脂肪酸中的一种，它的化学名称为全顺-Δ6、Δ9、Δ12－十八碳三烯酸，分子式为C₁₈H₂₈O₂，为无色油状液体，在空气中极易被氧化。GLA是人体必需脂肪酸之一，它在生物体内经过复杂的代谢过程，产生多种次生代谢产物。主要形成二高-γ-亚麻酸或花生四烯酸，进而转化为前列腺素、白三烯和凝血恶烷等。GLA和其系列代谢物在免疫系统、心血管系统、生殖系统、内分泌系统中都具有重要而广泛的生理作用。在临床上，GLA可用于某些老年性疾病如糖尿病、高血脂病、动脉粥样硬化、血栓性心脑血管疾病、癌症以及胃溃疡、肥胖症、精神分裂症、特应性湿疹、风湿性关节炎、脉管炎等，还可用于合成前列腺素的前体，有调节血压和胆固醇合成的作用，并可起到控制炎症和促进细胞增殖的功效。

一般植物中亚麻酸的含量比较少，而且往往还含有比较高浓度的α-亚麻酸，该物质是GLA的同分异构体，在GLA的提纯过程中不易分离。研究发现，一些藻类例如栅藻、螺旋藻等中，GLA占总脂肪酸的含量可达15-25％，经过藻种选择和培养条件优化，GLA的含量甚至可高达30-40％，远高于高等植物中的GLA含量。因此，可从这些藻类中提取GLA用于科学研究或临床用途。

在生物体内，长链脂肪酸一般以脂肪酸酯的形式存在，脂肪酶可催化长链脂肪酸酯的水解。但是在水解难度上，C链上的多个不饱和键使C链高度弯曲，阻碍了脂肪酶与脂肪酸基团的结合，多不饱和脂肪酸酯比饱和脂肪酸酯或单不饱和脂肪酸酯更难被水解。正是具备了这种选择能力，使脂肪酶可用于多不饱和脂肪酸的富集。

然而，GLA的提取和纯化仍然存在许多问题。尤其是，当总脂中含有其他多不饱和脂肪酸，脂肪酶在催化水解过程中无法区分GLA和其他多不饱和脂肪酸，例如EPA(二十碳五烯酸)、DHA(二十二碳六烯酸)、ALA(α-亚麻酸)等，需要额外的步骤将其分开。

发明内容

由于GLA容易被氧化，为了保持GLA的品质，我们在提取和富集过程中尝试添加抗坏血酸作为抗氧化保护剂，结果出乎意料地，富集后的藻油中GLA的含量大大提高，其他不饱和脂肪酸的含量大大降低。

基于以上发现，本发明提供了一种使用固定化脂肪酶富集藻油中的GLA的方法，包括以下步骤：

S1：将脂肪酶固定化，得到固定化脂肪酶；

S2：配制脂肪酶-藻油反应体系，所述脂肪酶-藻油反应体系中包含藻油、水、固定化脂肪酶和0.5-2mM的抗坏血酸，使所述脂肪酶-藻油反应体系反应8-12h；

S3：使用有机溶剂从反应后的所述脂肪酶-藻油反应体系中萃取有机相，即得到GLA富集化的藻油。

在一个优选实施方案中，S2中，所述脂肪酶为CCL脂肪酶，所述反应在40-43℃振荡下进行。

在一个优选实施方案中，S2中，所述脂肪酶-藻油反应体系中的水与藻油的重量比为1:1.5-1:2。

在一个优选实施方案中，S2中，所述脂肪酶-藻油反应体系中固定化脂肪酶的含量为0.06-0.08g/20ml。