[发明专利]幽门螺旋杆菌脂多糖外核心八糖的制备方法

说明书

本发明公开了幽门螺旋杆菌脂多糖外核心八糖的制备方法，属于糖化学领域。幽门螺旋杆菌外核心八糖的结构为(α‑D‑Glc‑(1‑3)‑α‑D‑Glc‑(1‑4)‑β‑D‑Gal‑(1‑7)‑D‑α‑D‑Hep[α‑D‑Glc‑(1‑6)‑α‑D‑Glc‑(1‑6)‑α‑D‑Glc‑(1‑2)‑D‑α‑D‑Hep]‑Linker。该结构由葡萄糖、半乳糖、七庚糖三种单糖构成。其中含有5个葡萄糖α糖苷键，1个半乳糖β糖苷键和两个七庚糖α糖苷键。本发明利用远程邻参与效应，溶剂效应，温度效应，添加剂以及离去基团的协同作用制备了该八糖。八糖的还原端还可接有连接臂用于将来与蛋白质连接制成糖缀合物，用于免疫学研究。

技术领域

本发明涉及幽门螺旋杆菌脂多糖外核心八糖的制备方法，属于糖化学领域。

背景技术

幽门螺旋杆菌(Helicobacter Pylori,H.P.)在1994年被世界卫生组织列为I类致癌因子，它是一种革兰氏阴性菌，栖息在上皮细胞表面，被胃粘膜表面的粘液覆盖。世界上超过50％的人口上消化道感染了幽门螺旋杆菌，在发展中国家高达70％感染人群，在发达国家也达到20％～30％。急性感染中20％的病人发展为溃疡，1％的感染着甚至可能发展为胃癌或者粘膜相关淋巴瘤。2005年诺贝尔生理或医学奖授予澳大利亚两位科学家Warren和Mashall以表彰他们对于发现幽门螺旋杆菌在引发消化道疾病以及胃癌中的重要作用。目前最普遍的治疗幽门螺旋杆菌的方法是“三联疗法”，它主要利用质子泵抑制剂以及两种抗生素对幽门螺旋杆菌进行清除。但是用药后患者容易复发，且常常出现恶心、腹泻、假膜性肠炎等不良反应。伴随着抗生素的频繁使用，抗抗生素的幽门螺旋杆菌的菌株不断被发现，这也使得抗生素治疗幽门螺旋杆菌的效率逐渐降低。所以对于幽门螺旋杆菌疫苗的开发一直都是科学家研究的热点。

目前市场上还没有能防止幽门螺旋杆菌感染或者治疗幽门螺旋杆菌的疫苗存在。糖类疫苗作为疫苗开发的新的目标分子，越来越被科学家们重视，细菌表面的多糖结构往往对于细菌的致病性以及人体内免疫识别具有重要的作用，所以通过化学方法合成幽门螺旋杆菌表面寡多糖用于开发幽门螺旋杆菌疫苗具有非常重要的意义。

幽门螺旋杆菌细胞表面的寡糖为脂多糖(Lipopolysacchardie,LPS)，它的LPS由O-抗原，核心结构，和脂质A三部分组成。幽门螺旋杆菌总共有6中血清型，O1-O6，它们的区别最主要是O-抗原糖部分的不同。不同血清型幽门螺旋杆菌的LPS的核心结构相对比较保守，所以通过化学合成其核心结构用作预防和治疗幽门螺旋杆菌感染的糖疫苗是非常好的一个选择。幽门螺旋杆菌核心结构包括内核心和外核心，外核心结构更容易暴露于环境，对于幽门螺旋杆菌感染引起体内的免疫反应有非常重要的作用。

目前研究的幽门螺旋杆菌脂多糖核心结构主要利用生物法从灭活的细菌中提取，其缺陷在于通常一次提取得到的产物量少，提取的分子结构也不均一，实验重复性差。所以我们选取幽门螺旋杆菌外核心八糖为我们的目标分子进行化学全合成，通过化学合成，我们可以大量的得到分子均一、结构确定的目标结构。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是通过化学方法合成幽门螺旋杆菌外核心八糖，这个八糖结构中含有五个葡萄糖1，2-α糖苷键的合成是目标八糖的关键步骤。本发明利用远程邻基参与效应、溶剂效应、温度效应，添加剂和离去基团的协同作用，提高糖基化过程的α选择性。此协同作用成功的解决了葡萄糖α糖苷键的形成的难题。利用合成的葡萄糖糖砌块，半乳糖糖砌块，庚糖糖砌块，合成保护的最后的目标八糖，最后脱去保护得到目标八糖如式1。同时，八糖的还原端为带有氨基的连接臂，为以后连接蛋白制成糖缀合物疫苗做了准备。