[发明专利]一种生物发酵生产乙基羟化物的方法

说明书

本发明公开了一种生物发酵生产乙基羟化物的方法，涉及药物中间体乙基羟化物的制备领域，制备步骤为：试管斜面培养、茄瓶斜面培养、种子液培养、发酵培养液培养、以及最在发酵培养液中加入乙基缩合物乙醇溶液，发酵72～80小时，得到乙基羟化物。本发明通过多个步骤对酵母菌进行定向培养，使酵母菌具有高度的选择性，同时其培养过程容易控制，生产周期短，整个制备过程中双羟化物小于1％，收率高，为80％‑90％，制得的乙基羟化物质量稳定，纯度保持在99.78％‑99.81，便于规模化生产。

技术领域

本发明涉及药物中间体乙基羟化物的制备，特别涉及一种生物发酵生产乙基羟化物的方法。

背景技术

左炔诺孕酮是一种白色结晶性粉末，无臭，无味。在三氯甲烷中溶解，在甲醇中微溶，在水中不溶。主要用作探亲避孕药和紧急避孕药，与雌激素合并使用，系短效和长效口服避孕药，有抑制排卵作用，是当前国内外应用最广泛的。也可用于治疗月经不调，子宫功能性出血及子宫内膜异位症等。

左炔诺孕酮(LNG)为全合成的强效孕激素，是消旋炔诺孕酮的光学活性体，活性比炔诺孕酮强1倍，约为炔诺酮的100倍。为此，剂量比炔诺孕酮可减半，不良反应也减少。左炔诺孕酮主要作用于下丘脑和垂体，使月经中期FSH和LH水平的高峰明显降低或消失，卵巢不排卵，有明显的抗雌激素活性，比炔诺酮强10倍左右，几乎不具有雌激素活性。能使宫颈粘液变稠阻碍精子穿透。对子宫内膜转化显示极强的孕激素活性，可使子宫内膜变薄，内膜上皮细胞呈低柱形，分泌功能不良，不利于孕卵着床。LNG也有一定雄激素活性和蛋白同化作用，口服或皮下注射均可抑制排卵。

乙基羟化物是合成左炔诺孕酮(LNG)的重要的中间体，目前的制备方法是采用啤酒酵母菌对乙基缩合物进行还原：

但该乙基羟化物制备采用的生物法发酵菌为啤酒酵母菌，使用该菌种生产，主要问题为该菌种选择性差，培养过程条件苛刻，难以控制，导致双羟基化物达20％左右，且生产周期较长，收率不高，不利于工业化生产。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种生物发酵生产乙基羟化物的方法，该方法过程易于控制，生产周期短，便于规模化生产，同时得到的乙基羟化物质量稳定，收率高。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为一种生物发酵生产乙基羟化物的方法，包括如下步骤：

S1：将酵母菌接入试管斜面培养基中，并置于温度26-28℃的恒温条件下培养时间48h，所述试管斜面培养基由麦芽汁40ml：琼脂1g组成，PH自然；

S2：将S1步骤中培养好的酵母菌接入茄瓶斜面培养基中，并置于温度26-28℃的恒温条件下培养时间48h，所述茄瓶斜面培养基由水100份、葡萄糖3份、玉米浆2份、琼脂2份组成，PH自然；

S3：将S2步骤中培养好的酵母菌接入种子培养基中，并置于温度28-30℃、空气压力0.05-0.06mpa条件下搅拌、培养至种子培养基中的吸光度大于1.0×10，得到种子液；所述种子培养基由水100份、葡萄糖5份、玉米浆2.5份、泡敌0.1份组成，调节PH至4.4-4.6；

S4：将S3步骤中种子液接入发酵罐培养基中并置于温度28-30℃、空气压力0.05-0.06mpa条件下搅拌、培养至发酵罐培养基中的吸光度大于1.2×10，得到发酵培养液；所述种子液与发酵罐培养基按各自所占发酵罐体积的2-10％：40-70％进行混合，总体积不超过发酵罐体积的80％，所述发酵罐培养基由葡萄糖4份、玉米浆2.5份、水100份、泡敌0.02份组成，调节PH至4.4-4.6；

S5：在发酵培养液中加入乙基缩合物乙醇溶液，得到发酵液，发酵液在温度为29～31℃条件下通入压缩空气发酵72～80小时，得到乙基羟化物；其中，乙基缩合物乙醇溶液通过将乙基缩合物加热溶于95％乙醇溶液中制得。