[发明专利]一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及食品安全检测领域，具体地说，本发明涉及一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗的试剂盒。

背景技术

克伦特罗（Clenbuterol，CBL）是一种β-肾上腺素受体激动剂，主要以盐酸盐形式存在，在饲料中添加克伦特罗，可促进动物生长，抑制脂肪沉积、提高蛋白质含量、增加酮体瘦肉率、改善肉质等作用。因此，近年来在经济利益的驱使下，不法分子将大量克伦特罗用于畜牧业和养殖业。人体摄入过多的CBL会导致一系列不良反应，主要有肌肉震颤、心跳和呼吸加快等，严重的会危及生命。鉴于此，许多国家已经禁止将克伦特罗作为饲料及饲料添加剂使用，我国农业部也于2002 年明确将其列入《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》，并规定在动物性食品中不得检出CBL。

目前克伦特罗的检测方法主要有5种：气相色谱-质谱联用法（GC/MS），高效液相色谱法（HPLC），酶连免疫分析法，胶体金免疫层析法、荧光免疫层析法；GC/MS可用于饲料、血液、组织中盐酸克伦特罗的分析，检测限为0.5 ppb，与高效液相色谱法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低。因此，中国、欧盟及美国等国家将气相色谱-质谱联用法定为检测盐酸克伦特罗的确证性方法。HPLC具有检测精确度高、假阳性率低的特点，其最低检测限为1~15ppb，国内已将高效液相色谱法作为检测盐酸克伦特罗残留的半确证性方法。前述两种检测方法缺点是检测过程烦琐、检测时间长, 需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。酶联免疫法具有检测准确、灵敏度高、仪器设备简单等优点，但检测时间长、操作繁琐不能实现现场快速检测。胶体金和荧光免疫层析试剂具有操作简便、快速、试剂安全、不需要特殊仪器和设备等优点，但存在准确度不高，灵敏度低等缺点。

发明内容

本发明的目的在于克服上述技术缺陷，提供一种成本低廉、操作简单、准确、灵敏的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒，包括BSA-CBL包被磁珠、荧光物质标记CBL抗体、洗涤液、增强液和克伦特罗标准品溶液。

在上述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒中，所述的BSA-CBL包被磁珠为带有官能团修饰的直径1~3μm的超顺磁珠与蛋白的共价偶联物，所述磁珠为羧基磁珠、氨基磁珠、羟基磁珠、甲苯磺酰基磁珠、NHS磁珠、链酶亲和素磁珠、蛋白A磁珠、蛋白G磁珠、抗小鼠IgG磁珠、亲水磁珠、疏水磁珠中的一种或几种。

在上述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒中，所述的荧光物质为镧系鳌和物。所述的荧光物质为由铕（Eu³⁺）、钐（Sm³⁺）、铽（Tb³⁺）或镝（Dy³⁺）等稀土元素组成的螯合物。所述荧光物质的激发波长为300~350nm，发射波长为500~650nm。

在上述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒中，所述的洗涤液配方为：0 .8~1 .2% Tween-20，0.05% Proclin300，pH 7.2~7.5 0.05M Tris-Hcl缓冲液。

在上述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒中，所述的增强液配方为：0.03%乙酸钠、0.0001~0.0005%β-NTA、0.0024% TOPO 、0.08%醋酸、0.1%无水乙醇、0.05%的Triton X-100的水溶液。

在上述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒中，所述的克伦特罗标准品溶液共6瓶，浓度分别为0μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L。