[发明专利]一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒

权利要求书

1.一种磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒，其特征在于包括BSA-CBL包被磁珠、荧光物质标记CBL抗体、洗涤液、增强液和克伦特罗标准品溶液。

2.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒，其特征在于，所述的BSA-CBL包被磁珠为带有官能团修饰的直径1~3μm的超顺磁珠与蛋白的共价偶联物，所述磁珠为羧基磁珠、氨基磁珠、羟基磁珠、甲苯磺酰基磁珠、NHS磁珠、链酶亲和素磁珠、蛋白A磁珠、蛋白G磁珠、抗小鼠IgG磁珠、亲水磁珠、疏水磁珠中的一种或几种。

3.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒，其特征在于，所述的荧光物质为镧系鳌和物；荧光物质的激发波长为300~350nm，发射波长为500~650nm。

4.如权利要求3所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒，其特征在于，所述的荧光物质为由铕、钐、铽或镝组成的螯合物。

5.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒，其特征在于，所述的洗涤液配方为：0 .8~1 .2% Tween-20，0.05% Proclin300，pH 7.2~7.5 0.05M Tris-Hcl缓冲液。

6.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒，其特征在于，所述的增强液配方为：0.03%乙酸钠、0.0001~0.0005%β-NTA、0.0024% TOPO 、0.08%醋酸、0.1%无水乙醇、0.05%的Triton X-100的水溶液。

7.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒，其特征在于，所述的克伦特罗标准品溶液共6瓶，浓度分别为0μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L。

8.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒，其特征在于，所述的BSA-CBL包被磁珠的制备方法：将羧基磁珠放到离心管中，将离心管放置在磁力架中，利用磁力架进行磁珠和缓冲液的分离，用0.05M pH6.0的2-（N-吗啡啉）乙磺酸洗涤磁珠3~5次；向上述洗涤好的磁珠中加入0.05M pH6.0的2-（N-吗啡啉）乙磺酸，加入30μL 10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸溶液和30μL 50mg/ml N-羟基琥珀酰亚胺，室温震荡反应0.5~1小时；将活化好的磁珠置于磁力架上，弃上清，收集活化好的磁珠；加入BSA-CBL，室温持续旋转孵育30~240分钟；将磁珠置于磁力架上，弃上清，收集免疫磁珠；加入含有1%BSA 0.05M pH 8.0的Tris-HCl缓冲液，重悬磁珠，封闭未偶联BSA-CBL的活化羧基位点，反应30~60min；将磁珠置于磁力架上，弃上清，加入100μL免疫磁珠保存液。

9.如权利要求1所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒，其特征在于，所述的免疫磁珠保存液为含5%BSA，5%蔗糖，0.1%Tween-20和0.1%聚乙烯吡咯烷酮的0.05M pH 8.0的Tris-HCl缓冲液。

10.如权利要求4所述的磁珠时间分辨荧光免疫定量检测克伦特罗试剂盒，其特征在于，所述的荧光物质标记CBL抗体铕标抗体的制备方法为：将CBL单克隆抗体置于30KD超滤离心管，离心，弃去滤液；加入标记缓冲液，离心，弃去滤液，重复此操作4~5次；将离心管滤膜反转，离心，收集浓缩的抗体，加入标记缓冲液，静置，再将离心管滤膜反转，离心，收集浓缩的抗体；按照质量比铕螯合物DTPA-Eu=5:1的比例充分混匀，放入旋转培养器，室温反应；用SepHadex TM G-50葡聚糖凝胶柱纯化铕标CBL抗体，然后加入铕标抗体保存剂，使BSA和Proclin300终浓度为0.2%，经0.22μm滤膜过滤，储存备用；

或者所述的荧光物质标记CBL抗体钐标抗体的制备方法为：取出CBL单克隆抗体置于30KD超滤离心管，离心，弃去滤液；加入标记缓冲液，离心，弃去滤液；重复此操作4~5次；将离心管滤膜反转，离心，收集浓缩的抗体；按照质量比抗体：钐螯合物=4:1的比例充分混匀，放入旋转培养器，室温反应16~20小时；用SepHadex TM G-50葡聚糖凝胶柱纯化钐标CBL抗体，然后加入钐标抗体保存剂，使BSA和Proclin300终浓度为0.2%，经0.22μm滤膜过滤，储存备用。