[发明专利]一种脐带间充质干细胞药物在促进皮肤伤口愈合中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种脐带间充质干细胞药物在促进皮肤伤口愈合中的应用。

背景技术

皮肤伤口修复是一个复杂的编排过程，其在受伤时被激活，它包括发炎时的多细胞重叠和协调阶段、血管生成和肉芽组织的形成、再上皮化和纤维增生或基质形成和修复。促炎细胞因子减少、新血管形成受阻或白细胞募集减损，都可能扰乱并延缓伤口的愈合。尽管目前使用的有效伤口敷料、软膏和器械都非常广泛，但伤口愈合仍然是临床的挑战。其中慢性伤口代表着越来越普遍和代价高昂的公共健康问题，随着紧急护理的改善，人们的寿命越来越长，继而患有糖尿病和其他与衰老相关的慢性疾病的患者数量日益增长。与衰老相关的疾病和创伤难愈有一定的联系。

据报道，皮肤间充质干细胞能填充正常皮肤的凹陷处，保持静止，并且在损伤后保持活跃，有助于伤口闭合。研究表明，间充质干细胞旁分泌信号是增强伤口修复的主要基础机制。据报道，骨髓间充质干细胞(BM-MSC)能促进伤口愈合，但是提取它们需要开刀手术和人工方法。提取脂肪干细胞(ADSC)也需要进行外科手术。随后，我们专注于一个更有优势的间充质干细胞来源，即从脐带提取的华顿氏胶。WJ-MSCs可以自然分离，可以出生后从丢弃的脐带中剖离，不需要额外手术。所以提取WJ-MSCs是无创的，没有痛苦的。事实上，研究表明山羊WJ-MSCs可以促进伤口修复，形成的瘢痕最小。但据我们所知，没有关于人类WJ-MSCs对人类皮肤伤口作用的报道。研究表明，WJ-MSCs代表一种非常有效的干细胞来源，在动物模型中具有免疫豁免、抗癌、抗纤维化的特性。对于已经遭受顽固性难愈合皮肤创伤的患者而言，由于WJ-MSCs的免疫豁免性和普遍持久的可用性，同种异体移植作为现有的治疗方式，可能是一种适当的治疗策略。

目前，较多的干细胞制剂均单纯采用PBS或生理盐水作为细胞制剂的溶剂，在复杂的体内环境中，很大程度上限制了干细胞修复创伤愈合的能力，使治疗效果不尽人意。

发明内容

本发明提供一种一种脐带间充质干细胞药物在促进皮肤伤口愈合中的应用，来解决在复杂的体内环境干细胞修复创伤愈合能力较低的技术问题。

本发明的技术方案为：一种脐带间充质干细胞药物在促进皮肤伤口愈合中的应用，所述脐带间充质干细胞药物按照重量百分比计包括：8-10％脐带间充质干细胞、1-3％人类纤维母细胞、7-9％磷脂、7-9％胆固醇、2-4％纳米磁体、2-4％复方电解质、6-8％小分子活性肽、3-5％中药提取物、2-4％营养复合物、0.5-1％烟酰胺单核苷酸(NMN)、0.4-1.8％低氧诱导因子、0.3-1.2％人纤溶酶原激活物抑制因子1、0.8-1.5％转化生长因子、1-2％人体血小板、0.5-1.5％透明质酸钠、5-7％磷酸缓冲液、8-10％生理盐水、0.3-0.5％稳定剂、0.2-0.4％抗氧化剂、0.3-0.5％抗菌剂、0.5-1％渗透压调节剂、余量为重蒸馏水。

进一步地，所述脐带间充质干细胞药物的制备方法包括以下步骤：

S1:将人脐带间充质干细胞经原代分离培养后，进行传代培养，取传代培养的P5-P20代人脐带间充质干细胞，在细菌培养皿中培养7-10天，至细胞达到70-80％的融合度，然后再加入体积比为1:1的0.25％胰蛋白酶与0.1％胶原酶的混合酶液，消化30-60min，再利用涡流混合器进行震荡5-10min，剥离吸附在细菌培养皿壁的细胞膜层；

S2:将所述细胞膜层转移到含有细胞诱导培养液中的培养瓶内，诱导生成人类纤维母细胞，传代培养3-5代，离心分离后得到人脐带间充质干细胞与人类纤维母细胞的混合细胞，用流式细胞仪进行实时监测，控制人脐带间充质干细胞与人类纤维母细胞的比例达到8-10:1-3范围内时，即放入4℃冰箱内待用；

S3:将所述中药提取物用所述磷酸缓冲液进行溶解，再将所述纳米磁体与营养复合物分别用1/3的所述生理盐水进行溶解，分别得到中药提取物溶液、纳米磁体溶液、营养复合物溶液，待用；

S4:将所述磷脂与胆固醇溶解于8-10倍二者混合体积比的乙醚中，再将所述乙醚减压完全汽化，然后依次加入所述中药提取物溶液、纳米磁体溶液、营养复合物溶液，在37℃水浴恒温下，通过超声波进行融合后，再放入磁化器内进行磁化，磁场为500-1000高斯，得到磁化载药脂质体；