[发明专利]一种脐带间充质干细胞药物在促进皮肤伤口愈合中的应用

权利要求书

1.一种脐带间充质干细胞药物在促进皮肤伤口愈合中的应用，其特征在于，所述脐带间充质干细胞药物按照重量百分比计包括：8-10％脐带间充质干细胞、1-3％人类纤维母细胞、7-9％磷脂、7-9％胆固醇、2-4％纳米磁体、2-4％复方电解质、6-8％小分子活性肽、3-5％中药提取物、2-4％营养复合物、0.5-1％烟酰胺单核苷酸(NMN)、0.4-1.8％低氧诱导因子、0.3-1.2％人纤溶酶原激活物抑制因子1、0.8-1.5％转化生长因子、1-2％人体血小板、0.5-1.5％透明质酸钠、5-7％磷酸缓冲液、8-10％生理盐水、0.3-0.5％稳定剂、0.2-0.4％抗氧化剂、0.3-0.5％抗菌剂、0.5-1％渗透压调节剂、余量为重蒸馏水。

2.如权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞药物在促进皮肤伤口愈合中的应用，其特征在于，所述脐带间充质干细胞药物的制备方法包括以下步骤：

S1:将人脐带间充质干细胞经原代分离培养后，进行传代培养，取传代培养的P5-P20代人脐带间充质干细胞，在细菌培养皿中培养7-10天，至细胞达到70-80％的融合度，然后再加入体积比为1:1的0.25％胰蛋白酶与0.1％胶原酶的混合酶液，消化30-60min，再利用涡流混合器进行震荡5-10min，剥离吸附在细菌培养皿壁的细胞膜层；

S2:将所述细胞膜层转移到含有细胞诱导培养液中的培养瓶内，诱导生成人类纤维母细胞，传代培养3-5代，离心分离后得到人脐带间充质干细胞与人类纤维母细胞的混合细胞，用流式细胞仪进行实时监测，控制人脐带间充质干细胞与人类纤维母细胞的比例达到8-10:1-3范围内时，即放入4℃冰箱内待用；

S3:将所述中药提取物用所述磷酸缓冲液进行溶解，再将所述纳米磁体与营养复合物分别用1/3的所述生理盐水进行溶解，分别得到中药提取物溶液、纳米磁体溶液、营养复合物溶液，待用；

S4:将所述磷脂与胆固醇溶解于8-10倍二者混合体积比的乙醚中，再将所述乙醚减压完全汽化，然后依次加入所述中药提取物溶液、纳米磁体溶液、营养复合物溶液，在37℃水浴恒温下，通过超声波进行融合后，再放入磁化器内进行磁化，磁场为500-1000高斯，得到磁化载药脂质体；

S5:将所述小分子活性肽加入到所述磁化载药脂质体内，在20-25℃水浴下，利用搅拌器搅拌4-6h，搅拌速度为20-40r/min，使小分子活性肽完全黏附在磁化载药脂质体表面，然后在磁化器内放置1-3min，磁场为600-700高斯，得到中间体悬浮液；

S6:将S2中的所述混合细胞加入到所述中间体悬浮液内，在5-10℃下，利用搅拌器搅拌90-120min，搅拌速度为10-30r/min，使其发生抗原抗体反应，并最终将混合细胞通过小分子活性肽结合在磁化载药脂质体上，得到细胞-脂质体；

S7:将所述烟酰胺单核苷酸(NMN)、低氧诱导因子、人纤溶酶原激活物抑制因子1、转化生长因子、人体血小板、透明质酸钠混合后用余下的1/3生理盐水进行溶解，得到微环境培养液，并将所述微环境培养液加入到所述细胞-脂质体内，静置活化20-60min；

S8:最后加入所述复方电解质、稳定剂、抗氧化剂、抗菌剂、渗透压调节剂，并利用所述重蒸馏水进行定容，既得到含有脐带间充质干细胞药物的注射液。

3.如权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞药物在促进皮肤伤口愈合中的应用，其特征在于，所述中药提取物是由黄芩苷、花青素、姜黄素、没食子鞣质、白藜芦醇以质量百分比为4:2:1:3:1配比而成。

4.如权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞药物在促进皮肤伤口愈合中的应用，其特征在于，所述营养复合物是由维生素E、维生素C、维生素B3、海洋多糖、α-亚麻酸以质量百分比为2:1:1:2:3配比而成。

5.如权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞药物在促进皮肤伤口愈合中的应用，其特征在于，所述复方电解质按照重量百分比计包括15-23％氯化钠、12-21％氯化镁、10-12％氨基酸钠、5-9％木糖醇、4-8％免疫球蛋白，余量为葡萄糖酸锌。