[发明专利]一种提高ELISA试剂盒信噪比的通用型酶标板洗涤液及其使用方法

说明书

本发明公开了一种提高ELISA试剂盒信噪比的通用型酶标板洗涤液及其使用方法，属于生物技术领域。本发明的提高ELISA试剂盒信噪比的通用型酶标板洗涤液包含0.15～0.35M的NaCl、0.05～0.1％vol的曲拉通X‑100、3～6g/L的十二烷基肌氨酸钠，其余为0.01M的磷酸缓冲液，其中磷酸缓冲液的pH值为7.2～7.4。本发明通过在洗涤液中添加洗涤能力较强的SDS和Triton‑X100，同时提高洗涤液的离子强度，有效控制了分子之间的非特异性相互作用，进而实现ELISA实验结果的低背景和高信噪比，提高检测的敏感性和准确性，且通用性较好，具有极强的推广应用潜力。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种能有效控制ELISA试剂盒操作过程中蛋白质之间的非特异性结合，降低背景，提高信噪比的通用型酶标板洗涤液。

背景技术

ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)又称酶联免疫吸附实验，是指将已知抗原或抗体包被与酶联板上，用于测试待检样品中是否有能与之特异性结合的抗体或抗原。由于ELISA方法具有方便、快速、敏感等特征，在科学研究和临床检验中被广泛应用。最初的ELISA方法主要包括直接法和间接法，随着研究的需要，人们根据抗原-抗体反应基本原理，又相继衍生出了夹心法、阻断法等，并开发出了相应的商品化试剂盒。此外，为了减少ELISA的操作程序，人们在传统两步法ELISA 的基础上，通过体系优化，又开发了“一步法”ELISA检测试剂盒。

尽管ELISA及衍生方法繁多，且操作步骤各异。但ELISA的核心是抗原-抗体反应，即是蛋白分子之间的相互作用(包括修饰后的有机化合物小分子甚至金属离子与抗体相互作用)，除了抗原-抗体特异性结合外，分子之间还存在非特异性相互作用。而非特异性结合将使背景增加，进而影响检测的准确性。酶标板洗涤旨在减少非特异性结合，降低背景，提高信噪比，使检测结果更准确。

对于酶标板洗涤液，最经典且广泛使用的是PBST(即在PBS中加入0.05％～0.5％的吐温20或吐温80)。但是，在研究中发现，用PBST 洗涤酶标板，对于很多ELISA实验特别是检测血清中的抗原或抗体，背景高，阴性样品的OD值甚至高达0.2～0.5(检测血清稀释倍数越小，背景越高)，难以和待检样品中低浓度检测靶标区分，降低了检测的敏感性和准确性。此外，在研究和检测中发现，一些商品化临床ELISA检测试剂盒或研究用ELISA检测试剂，也存在背景高，其cut off值(判定阈值)甚至高达0.3～0.4。因此，急需一种能降低背景信号信噪比的通用型酶标板洗涤液。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高ELISA试剂盒信噪比的通用型酶标板洗涤液，控制ELISA实验过程中抗原和抗体分子之间的非特异性结合，可降低未结合抗体所引起的背景信号，增加分析的信噪比，从而提高ELISA检测的敏感性和准确性。

为实现上述目的，本发明的技术方案提供一种提高TLISA试剂盒信噪比的通用通用型酶标板洗涤液，所述洗涤液包含0.15～0.35M的NaCl、 0.05～0.1％vol的曲拉通X-100(Triton-X100)、3～6g/L的十二烷基肌氨酸钠(SDS)，其余为0.01M的磷酸缓冲液(PB)，其中磷酸缓冲液的pH值为7.2～7.4。

优选地，所述0.01M磷酸缓冲液按以下步骤制备：取Na2HPO4· 12H2O 3.58g，KCl0.4g，KH2PO4 0.54g定溶于1000mL水中，用1M HCl和1M NaOH调节pH值到7.2～7.4(优选pH值为7.4)，即制得1L 0.01M的磷酸缓冲液。

优选地，所述洗涤液中NaCl的含量为0.25M。

优选地，所述洗涤液中曲拉通X-100的含量为0.08％vol。