[发明专利]CRISPR-Cas9系统特异性靶向人RSPO2基因的sgRNA及敲除方法和应用有效
| 申请号： | 201711288951.3 | 申请日： | 2017-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN108315330B | 公开（公告）日： | 2020-05-19 |
| 发明（设计）人： | 虞玲华;姚明 | 申请（专利权）人： | 嘉兴市第一医院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N15/90 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 傅朝栋;张法高 |
| 地址： | 314033 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | crispr cas9 系统 特异性 靶向 rspo2 基因 sgrna 方法 应用 | ||
1.一种CRISPR-Cas9系统中靶向人RSPO2基因的sgRNA，其特征在于，所述的sgRNA序列如SEQ ID NO：2、4、6、8、10中任意一条所示。
2.一种含有如权利要求1所述sgRNA对应的DNA序列的载体，所述的载体为病毒表达载体或非病毒表达载体，所述的DNA序列与载体相连。
3.一种含有如权利要求1所述sgRNA对应的DNA序列的CRISPR-Cas9重组慢病毒载体，其特征在于，其制备方法如下：首先合成寡核苷酸序列，寡核苷酸序列中：正义链：5`-CACC-G-(20N)-3`，反义链：5`-AAAC-(20N的互补序列)-C-3`，其中所述的20N为权利要求1所述sgRNA对应的DNA序列；将所述正义链和反义链磷酸化和退火，形成带有BsmBI粘性末端的片段，然后将其连接至经过BmsBI酶切线性化的载体lenti CRISPR上，得到CRISPR-Cas9重组慢病毒载体。
4.一种由权利要求3所述慢病毒载体包装的特异性敲除RSPO2基因的CRISPR-Cas9系统。
5.一种在体外利用如权利要求4所述CRISPR-Cas9系统特异性敲除人RSPO2基因的方法，其特征在于，将所述的CRISPR-Cas9系统感染人肝星状细胞LX2，特异性敲除人RSPO2基因。
6.如权利要求4所述CRISPR-Cas9系统在制备肝纤维化治疗药物或试剂盒中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于嘉兴市第一医院，未经嘉兴市第一医院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201711288951.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
