[发明专利]大麦SSR引物组及利用该引物组构建啤酒大麦品种指纹图谱的方法

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，更具体地说，本发明涉及利用SSR技术并结合毛细管电泳技术构建主要进口啤酒大麦品种的SSR指纹图谱的方法。

背景技术

啤酒大麦是啤酒生产的主要原料，大麦的质量直接影响啤酒的品质和口感；而大麦的质量受品种、产区、气候条件等因素的影响，大麦不同品种之间的淀粉、蛋白质、β-葡聚糖以及酶系活性等均存在一定差异，这些差异直接影响麦芽制造和啤酒酿造工艺。因此，大麦品种的真实性及纯度是啤酒酿造的关键。

目前，中国已成为世界上最大的啤酒生产国(刘慧，薛凤蕊.中国大麦贸易现状及发展趋势[J].农业贸易展望，2015,8:66-69.)。随着我国啤酒产量的不断增长，国产大麦产量及质量难以满足市场需求，啤酒大麦的进口量迅猛增长，位列进口谷物前3位，2013-2014年度进口量达到历史最高的489.1万t(李先德，孙志胜，张京.2014年世界和中国大麦与贸易形势及2015年展望[J].农业生产展望，2015,2:43-47.)。近年来，我国啤酒大麦主要进口国主要为澳大利亚、加拿大和法国；在国际贸易中，大麦品种是优质优价的，不同品种的价格相差数十美元/吨；一般情况下买卖双方会在贸易合同中对大麦品种以及品质指标等进行标注和规定，如澳大利亚的Gairdner、加拿大的Metcalfe、法国的Sebastian等等，如果进口的大麦与合同规定的品种不符或品种不纯导致大麦质量下降，则不但使我国在对外贸易中蒙受直接经济损失，也使我国啤酒工业遭受间接经济损失。所以，准确鉴别大麦品种是进口啤酒大麦品质检验中非常重要的工作，属于法定检验项目；然而，对于进口啤酒大麦品种的鉴定工作在质检系统内开展非常少。因此，开展进口啤酒大麦品种鉴定工作对于避免贸易经济损失、保证啤酒大麦质量及提高啤酒酿造业的生产效益等方面具有重要意义。

啤酒大麦的品种鉴定方法主要包括根据大麦形态特征进行鉴定的感官检验法和醇溶蛋白电泳法，但是由于感官检验法主观误差大，醇溶蛋白电泳法染色效果差、条带图像不容易判别等问题，这些方法不能满足实际的工作需要。DNA分子标记技术为大麦品种及纯度鉴定工作提供更大的研究手段和空间。Bunce(徐阿炳，朱睦元，袁妙葆等.RFLP技术及其在大麦研究中的应用[J].大麦科学，1991.2:5-12 4)等(1986)利用RFLP技术与SDS-PAGE对6种大麦品种鉴定进行比较分析；吴亚君(吴亚君，王斌，韩建勋等.采用RAPD-毛细管芯片电泳法鉴定啤酒大麦品系[J].食品与发酵工业，2012,38(2)：174-180.)等采用RAPD-毛细管芯片电泳法对19个啤酒大麦品系进行鉴定；初雷(初雷.酿酒大麦种质资源AFLP分子指纹图谱构建.[D]大连工业大学，硕士论文，2011.)利用AFLP技术对27种国内外酿造大麦品种进行鉴定研究；SSR标记技术的原理是根据SSR两侧的序列相对保守的特性，设计特异引物进行PCR扩增，根据串联重复单位数目的差异检测多态性。SSR标记对DNA需求量少，多态性高，结果稳定可靠等优点，在大麦品种及纯度鉴定等方面的研究已有相关报道。RUSSELJR(RUSSELJR，FULLERJD，MACAULAYM.Direct comparisons of level of genetic variation among barley accessions detected by RFLPs，AFLPs，SSRs，and RAPD[G].Symposiam：V International Oat conference and VII International Barley Genetics，1996.)等仅用11个SSR标记就区分了包括相同系谱来源在内的24个大麦基因型，并利用4对SSR标记区分这24种大麦品种。杨振华(杨振华.啤酒大麦SSR分子标记PCR反应体系的建立与优化[J].黑龙江农业科学.2015(5)：26-28.)利用正交设计，摸索适用于啤酒大麦遗传分析的SSR-PCR最佳反应体系。