[发明专利]大麦SSR引物组及利用该引物组构建啤酒大麦品种指纹图谱的方法

权利要求书

1.大麦SSR引物组，其特征在于，包括9对大麦SSR引物HVHVA1、HVM70、HVMLOH1A、GBM1008、HVCMA、WMS6、HVPLASC1B、HVM65和HVM6，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1～18所示。

2.权利要求1所述大麦SSR引物组在构建啤酒大麦品种指纹图谱中的应用。

3.一种啤酒大麦品种指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、从啤酒大麦种子中提取DNA；

S2、将大麦SSR引物组和S1提取得到的DNA分别进行SSR-PCR扩增反应，再将扩增得到的PCR产物进行毛细管凝胶电泳检测；

S3、将所述毛细管凝胶电泳检测结果转化成啤酒大麦品种指纹图谱；

所述大麦SSR引物组，包括9对大麦SSR引物HVHVA1、HVM70、HVMLOH1A、GBM1008、HVCMA、WMS6、HVPLASC1B、HVM65和HVM6，各引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1～18所示。

4.根据权利要求3所述的啤酒大麦品种指纹图谱的构建方法，其特征在于，S1中，所述啤酒大麦种子分别为：Scarlett、Bambina、Quench、Irina、Sebastian、Esterel、Cervoise、Prestige、Etincel、Metcalfe、Copeland、Hindmarsh、Baudin、Scope、Buloke、Traveler、Bass、Westminster、La Trobe Trial、Vlamingh、Gairdner。

5.根据权利要求3所述的啤酒大麦品种指纹图谱的构建方法，其特征在于，S2中，所述SSR-PCR扩增反应采用20μl反应体系，包括16μl mix、2μl引物、2μl DNA模板和6μl超纯水；所述引物是将所述大麦SSR引物组中的一组按照1:9的体积比加入超纯水稀释并正反混合得到；

所述SSR-PCR扩增反应的程序为：4℃预变性5min；94℃变性30s，退火30s，72℃延伸45s，35个循环；72℃延伸7min，4℃保存；9对大麦SSR引物的退火温度分别为：HVHVA1 52℃、HVM70 54℃、HVMLOH1A 46℃、GBM1008 50℃、HVPLASC1B 47℃、HVM65 47℃、HVCMA 50℃、HVM6 45℃、HVM63 53℃、WMS6 50℃。

6.一种啤酒大麦品种指纹图谱，其特征在于，由权利要求3或4或5中任意一条权利要求所述啤酒大麦品种指纹图谱的构建方法构建得到。

7.权利要求6所述啤酒大麦品种指纹图谱在鉴定啤酒大麦品种中的应用。

8.一种啤酒大麦品种的鉴定方法，其特征在于，其是通过权利要求6所述啤酒大麦品种指纹图谱完成，包括如下步骤：

S101、从待鉴定啤酒大麦种子中提取DNA；

S102、将大麦SSR引物组和S101提取得到的DNA分别进行SSR-PCR扩增反应，再将扩增得到的PCR产物进行毛细管凝胶电泳检测；

S103、将所述毛细管凝胶电泳检测结果与所述啤酒大麦品种指纹图谱比对，即可得到待鉴定啤酒大麦种子的品种；

所述大麦SSR引物组，包括9对大麦SSR引物HVHVA1、HVM70、HVMLOH1A、GBM1008、HVCMA、WMS6、HVPLASC1B、HVM65和HVM6，各引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1～18所示。

9.根据权利要求8所述啤酒大麦品种的鉴定方法，其特征在于，所述9对大麦SSR引物中的任意一对均可鉴定Scarlett、Bambina或Quench；所述9对大麦SSR引物中的

HVCMA+HVCMA+HVM6组合、HVCMA+HVCMA+HVM65组合、HVCMA+HVCMA+GBM1008组合、HVCMA+HVCMA+HVMLOH1A组合中的任意一个组合可鉴定Irina、Sebastian、Esterel、Cervoise、Prestige或Etincel；所述9对大麦SSR引物中的HVHVA1+HVM70+HVMLOH1A组合可鉴定Metcalfe、Copeland、Hindmarsh、Baudin、Scope、Buloke、Traveler、Bass、Westminster、La Trobe Trial、Vlamingh或Gairdner。