[发明专利]精子活性氧类物质定量测定试剂盒及其用途和使用方法

说明书

本发明提供一种活性氧定量检测试剂盒，包括氯化硝基四氮唑蓝冻干粉、氯化硝基四氮唑蓝溶解液、显色剂A、显色剂B、标准品；所述氯化硝基四氮唑蓝冻干粉是浓度为0.1～1mmol/L的氯化硝基四氮唑蓝药液冷冻干燥后的粉末；所述氯化硝基四氮唑蓝溶解液是浓度为0.01～0.5mol/L、pH为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液；所述显色剂A是浓度为0.01～0.3mol/L的弱酸性缓冲液；所述显色剂B是0.01％～2％三乙醇胺溶液；所述标准品为含有已知浓度为0～36mmol/L的过氧化氢溶液。本发明具有方法学清洁环保、能实现手工操作和自动化批量检测、且操作简单、易于临床推广应用的优点。

技术领域

本发明涉及一种活性氧类物质定量检测试剂盒及其用途，以及涉及利用这种试剂盒体外检测人体精子活性氧类物质浓度的方法。

背景技术

精液活性氧(reactive oxygen species,简称ROS)类物质主要由精子自身和精液中的白细胞产生，在生殖系统内，抗氧化酶系统和非酶性抗氧化物成分使ROS的产生和清除保持动态平衡。适量的活性氧在精子功能上扮演着多种角色，维持精子细胞的正常功能，是精子获能和顶体反应所必需的，但当ROS过量存在时，会导致细胞氧化应激反应，损伤机体的氧化防御系统，使精子运动功能改变、活力下降、死亡率升高，并影响精子的顶体反应及受精功能等。

现有技术中，在实验室对精子活性氧类物质(ROS)进行定量测量的方法有硫代巴比妥酸(TBA)法、鲁米诺化学发光法、辣根过氧化物酶法等。硫代巴比妥酸(TBA)法检测不够严谨，结果不精确，此法不便于评价活性氧的情况；鲁米诺化学发光法为世界卫生组织推荐的方法学，但操作过程中需使用到强酸性质的鲁米诺，对操作者、环境产生危害；辣根过氧化物酶法需使用到酸性腐蚀品三氯乙酸，也会对操作者、环境产生危害，且需要在0℃超声处理，临床使用不方便。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种方法学清洁环保、能实现手工操作和自动化批量检测、且操作简单、易于临床推广应用的活性氧(ROS)定量检测试剂盒，同时，本发明还提供其用途，以及一种利用该试剂盒检测人体精液标本中活性氧浓度的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种活性氧定量检测试剂盒，包括氯化硝基四氮唑蓝冻干粉、氯化硝基四氮唑蓝溶解液、显色剂A、显色剂B、标准品；

所述氯化硝基四氮唑蓝冻干粉是浓度为0.1～1mmol/L的氯化硝基四氮唑蓝药液冷冻干燥后的粉末；所述氯化硝基四氮唑蓝溶解液是浓度为0.01～0.5mol/L、pH为7.2～7.6的磷酸盐缓冲液；所述显色剂A是浓度为0.01～0.3mol/L的弱酸性缓冲液；所述显色剂B是0.01％～2％三乙醇胺溶液；所述标准品为含有已知浓度为0～36mmol/L的过氧化氢溶液。

作为优选方式，还包括微孔板条；所述氯化硝基四氮唑蓝冻干粉为分装于密封容器的多瓶，所述显色剂A、显色剂B、标准品分别独立装于瓶中。

作为优选方式，所述显色剂A为碳酸氢钠溶液或醋酸钠或磷酸二氢钾或柠檬酸缓冲液。

作为优选方式，所述氯化硝基四氮唑蓝药液的浓度为0.212mmol/L；所述氯化硝基四氮唑蓝溶解液是浓度为0.05mol/L的磷酸盐缓冲液；所述显色剂A是浓度为0.25mol/L的碳酸氢钠溶液；所述显色剂B的浓度是1.62％的三乙醇胺溶液；所述标准品是浓度为36mmol/L的过氧化氢溶液。

本发明提供一种活性氧定量检测试剂盒的用途，用于检测成年男性精子活性氧类物质的含量。

本发明提供一种使用活性氧定量检测试剂盒检测精子活性氧的方法，包括如下步骤：

步骤一，将所取新鲜精液标本进行前处理，精子浓度记为M×10⁶/mL；