[发明专利]一种同时检测α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白含量的方法

权利要求书

1.一种同时检测α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白标准品在载体片基内进行点样操作，然后固定、封闭、洗涤；

(2)在经由步骤(1)处理后的部分反应孔内加入不同浓度梯度的α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白标准品混合溶液和相应的混合抗体，在剩余反应孔内加入待测样品溶液和α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白混合抗体，然后所有反应孔反应并洗涤；

(3)在经由步骤(2)处理后的每个反应孔内加入纳米材料或者生物酶标记二抗，继续反应并洗涤；

(4)在经由步骤(3)处理后的每个反应孔内加入显色剂，避光反应；

(5)用芯片扫描仪对步骤(4)反应后的载体片基进行图像扫描，根据不同浓度的灰度值信号，利用外标曲线法定量检测待测样品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的载体片基为多孔板、高聚物片基、膜或玻片。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述固定是指点好后的载体片基在37℃中固定0.5h-4h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述封闭是指向固定后的每个反应孔内加入10～300μL 1～20mg/mL的蛋白质缓冲溶液封闭0.5h-4h。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的蛋白质缓冲溶液为牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白或多聚赖氨酸。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述反应是指在20～37℃下反应0.5～2h。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的标记二抗为羊抗鼠、羊抗兔、兔抗鼠、兔抗羊、鼠抗羊、鼠抗兔、驴抗羊或者驴抗兔。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述反应是指在20～37℃下反应0.5～2h；所述洗涤是指用PBST洗涤3～4次，每次3～10min。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述的显色剂为生物催化剂及其底物或者化学催化剂及其底物。