[发明专利]一种C2C12成肌细胞分化培养的培养基

权利要求书

1.一种C2C12成肌细胞分化培养的培养基，其特征在于：包括分化培养基和分化培养基，所述的生长培养基为以高糖 DMEM 培养基为基液，含有 10%胎牛血清，1%双抗，牛蒡子苷8-10μg/升，EGF0.2-0.3mg/L，胰岛素100-200mg/L，地黄多糖30-50mg/L；

所述的分化培养基为以高糖 DMEM 培养基为基液，含有2%马血清，1%双抗，大豆苷原8-10μg/升，石榴提取物20-30mg/L，金银花提取物10-15mg/L。

2.根据权利要求1所述的一种C2C12成肌细胞分化培养的培养基，其特征在于：所述的生长培养基为以高糖 DMEM 培养基为基液，含有 10%胎牛血清，1%双抗，牛蒡子苷8μg/升，EGF0.3mg/L，胰岛素160mg/L，地黄多糖35mg/L。

3.根据权利要求1所述的一种C2C12成肌细胞分化培养的培养基，其特征在于：所述的分化培养基为以高糖 DMEM 培养基为基液，含有 2%马血清，1%双抗，大豆苷原10μg/升，石榴提取物30mg/L，金银花提取物13mg/L。

4.根据权利要求1-3任一项所述的C2C12成肌细胞分化培养的培养基，其特征在于：所述的牛蒡子苷的制备方法为：牛蒡子药材粉碎至40-50目的颗粒 ，加8-10倍的水，回流提取两次，每次1-2h，合并滤液，滤液过滤，然后用D101树脂吸附洗脱，洗脱依次用2倍树脂体积的水、20%乙醇和50%乙醇洗脱，收集50%乙醇洗脱液，浓缩除去乙醇，浓缩后加入0.5%的活性炭煮沸30min，离心去除活性炭，0～4℃静置过夜 ，过滤干燥 ，即得。

5.根据权利要求1-3任一项所述的C2C12成肌细胞分化培养的培养基，其特征在于：所述的地黄多糖得制备方法为：熟地黄粉碎至40-50目的颗粒，石油醚脱脂， 80％的乙醇脱单糖、低聚糖，药渣加热挥发完溶剂，然后按照料液比1g：60ml加水，纤维素酶3％，调节pH为4.0，充分搅拌，在40℃下酶解2小时，然后超声波提取：超声频率为40KW，提取时间3min，离心分离，转速5000r/min，离心30分钟，取滤液，在滤液中加入85％乙醇溶液，并用碳酸氢铵调节pH为8.0，沉淀多糖，收集沉淀，对收集的沉淀进行减压蒸馏，得到地黄多糖。

6.根据权利要求1-3任一项所述的C2C12成肌细胞分化培养的培养基，其特征在于：所述的石榴提取物的制备方法为：酸石榴表面洗净擦干，手工去皮、剥出籽粒，取汁，混匀后，用孔径0.1mm滤布过滤，4000 r／min离心10min，收集上层石榴汁清液， 调整滤液的pH为2.0，用AB-8树脂吸附，用70%的乙醇解吸，收集解吸液，浓缩干燥，既得石榴提取物。

7.根据权利要求1-3任一项所述的C2C12成肌细胞分化培养的培养基，其特征在于：所述的金银花提取物的制备方法为：金银花粉碎至50-80目，然后按照料液比1g：10ml加入70%的乙醇回流提取两次，每次1h，合并滤液，减压浓度除去乙醇，将浓缩液的pH值调至1.8-2.2， 以4倍量的乙酸乙酯分4次萃取，合并萃取液，用适量水洗涤1-2次以质量分数为 50% 的氢氧化钠溶液调pH值调为6-7，分离取水层，然后用D-101大孔树脂纯化，洗脱用70%乙醇，收集洗脱液，减压浓缩干燥，既得金银花提取物。