[发明专利]一种利用松花粉粕制备抗氧化松花粉肽的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种利用松花粉粕制备抗氧化松花粉肽的方法。本发明将松花粉水提物制备过程中产生的大量松花粉粕残渣废物再利用，充分利用了残渣中的大量优质蛋白质资源，同时缓解了环境压力。制备的具有抗氧化活性的松花粉肽具有安全性高、氨基酸配比合理等特点，在食品领域有着广阔的市场前景。所提供的制备方法工艺简单、反应温度低，能提高松花粉蛋白的抗氧化性，在最佳工艺条件下所得到的松花粉肽超氧阴离子抑制率为18.7％，DPPH清除率达到76.8％，羟自由基抑制率达到94.6％，可为食品、医药等行业提供优质的天然抗氧化剂。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种利用松花粉粕制备抗氧化松花粉肽的方法。

背景技术

人类的机体衰老机制和疾病产生机理长久以来都是国内外学者们致力解决的重大科学问题。近年来，随着Harman自由基理论的提出，人们对人体内氧化产生的自由基的认识逐渐深入，发现人的衰老和多种疾病的发生都与自由基的过量产生相关。探索安全高效的消除自由基方法逐渐成为了当前学者们研究的热点。抗氧化剂是近年来发展较快的一类能够消除自由基的物质，既包括化学合成的抗氧化剂如BHA、BHT等，也包括大豆多肽等抗氧化活性多肽。与化学合成的抗氧化剂相比，抗氧化多肽具有安全、高效等特点，能够更广泛的作为基料或功能因子应用于保健食品及化妆品等的开发。

松花粉是指经人工采集得到的马尾松(Pinus Massoniana)等松树的干燥花粉。松花粉作为生命的遗传物质,含有丰富的蛋白质、微量元素、黄酮及必需脂肪酸等营养成分及生物活性物质,具有抗衰老、抗氧化、抗疲劳、促进生长发育、调整机体代谢等多种功效。目前松花粉水提物的制备技术已相对成熟，并形成了国珍松花粉等一系列在售产品。但在松花粉水提物的制备过程中，却产生了大量的松花粉粕残渣，这些残渣中还存在着大量优质的蛋白质资源尚未得到充分利用。简单的丢弃松花粉粕不仅会带来环境的压力，也造成了大量营养物质的浪费。

因此，开发一种安全高效的从松花粉粕中制备活性松花粉肽的方法，成为亟待解决的问题。目前国内关于利用蛋白酶水解松花粉粕制备抗氧化肽的研究未见报道。利用松花粉粕开发具有清除自由基作用的抗氧化肽具有重要的理论意义和应用价值。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种松花粉粕中制备具有抗氧化活性的松花粉肽的方法，制得具有安全性高、氨基酸配比合理、良好抗氧化性的松花粉肽。

本发明提供一种利用松花粉粕制备抗氧化松花粉肽的方法，步骤如下：

(1)将松花粉粕用粉碎机粉碎，按照1:(10-15)(w:v)的比例加入乙醇，在60℃水浴中搅拌提取1-3h，离心10-20min，收集沉淀在自然通风条件下静置18-24h，加水配制成4-8wt％的松花粉粕溶液；

(2)取步骤(1)的松花粉粕溶液用碱性溶液调节pH为10.0-12.0，在60℃水浴中搅拌提取1-3h，离心10-20min，收集上清液；上清液用酸性溶液调节pH为4.5-5.5，离心10-20min，收集沉淀，加水配制成2-4wt％的松花粉蛋白分散液，并调节pH为7.0-8.0，得到松花粉分离蛋白溶液；

(3)取步骤(2)的松花粉分离蛋白溶液通过碱性溶液调节pH为8.0-10.0，然后加入蛋白酶1000-5000U/g，在50-60℃水浴中水解1-6h，保持温度和pH恒定，当水解度达到7.8-24.5％时停止酶解，得到松花粉蛋白酶解液；

(4)取步骤(3)的松花粉蛋白酶解液于85-100℃水浴灭活蛋白酶5-15min，冷却至20-25℃后，离心10-20min，收集上清液，经超滤膜进行超滤，得到松花粉肽超滤液；

(5)将步骤(4)的松花粉肽超滤液进行减压蒸发浓缩和真空冷冻干燥，得到抗氧化松花粉肽产品。

其中，步骤(1)中所述的乙醇浓度为80wt％。