[发明专利]一种增加CHO细胞群蛋白表达量的方法

权利要求书

1.一种增加CHO细胞群目标蛋白表达量的方法，其特征在于，利用shRNA技术控制乳酸代谢通路上关键酶的转录，具体步骤包括：1)构建含有待表达蛋白序列的质粒和含有表达乳酸代谢通路上关键酶的shRNA的质粒；2)将步骤1)中构建的质粒通过转染的方法引入CHO细胞中；3)对步骤2)中转染后细胞进行抗生素筛选；4)待细胞状态恢复后，采用步骤3)筛选后的细胞生产目标蛋白；所述表达乳酸代谢通路上关键酶是丙酮酸脱氢酶激酶3（PDK3）。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，含有表达乳酸代谢通路上关键酶的shRNA的质粒是将表达乳酸代谢通路上关键酶所对应的shRNA序列以及相应的启动子构建至质粒上。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，该质粒还包含抗生素基因用于筛选。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，使用去内毒素的质粒抽提试剂盒提取质粒DNA。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，采用脂质体或者电击方式将含有表达乳酸代谢通路上关键酶的shRNA的质粒和含有待表达蛋白序列的质粒共同转染入宿主细胞中。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，待转染宿主CHO细胞在转染当天细胞密度在1×10⁶个细胞/毫升以上。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中，转染后5-48小时内，向转染后细胞中加入含有筛选抗生素的传代培养基。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中，加入抗生素筛选后，每隔两到四天，对细胞进行换液或者传代。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中，待细胞活率恢复至90％以上后开始目标蛋白生产。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中，将步骤3)筛选后的细胞稀释进入生产使用的基础培养基中，通过批次补料工艺表达目标蛋白。

11.一种通过如权利要求1-10任一项所述的方法所获得的CHO细胞群。