[发明专利]一种重金属荧光免疫检测方法及其层析试剂盒

说明书

本发明公开了一种重金属荧光免疫检测方法，包括以下步骤：1)样品前处理：将血液样本进行酸化处理，离心，取上清液，加入螯合剂进行鳌合反应，然后加入碱性溶液中和；2)将含有修饰基团的荧光微球与重金属特异性抗体制成荧光微球溶液；3)抗原的包被：将重金属的完全抗原包被在检测线区(T)；将羊抗鼠抗体包被在质控线区(C)；4)检测，通过标准曲线计算浓度值。该方法能有效地使血液样本中的重金属离子释放出来，从而能有效地避免假阴性或检测含量偏低。该方法的特异性高、操作简单，所需成本低，适用于即时现场分析。本发明同时还提供一种重金属荧光免疫层析试剂盒，该试剂盒的特异性高、制作成本低。

技术领域

本发明涉及一种体外免疫诊断技术领域，尤其涉及一种重金属荧光免疫检测方法及其层析试剂盒。

背景技术

重金属指比重大于4或5的金属，约有45种，包括铜、铅、锌、铁、钴、镍、锰、镉、汞、钨、钼、金、银等。这些重金属中，有一部是生命活动所需要的微量元素，如锰、铜、锌；而有一些是并非生命活动所必须、且部分超过一定量后对人体具有较大毒性，如汞、铅、镉。

大部分重金属不能被生物降解，相反却能在食物链的生物放大作用下，成千百倍地聚集，最后进入人体。重金属可能会在人体的某些器官中累积，造成慢性中毒。不同的重金属在进入人体后在不同的体内脏器中累积，进而引发不同的中毒反应。

而对于怀孕的妈妈而言，如果体内重金属超标，可引起自发性流产，毒血症和贫血等症状；另外过多的重金属(例如铅)，会通过胎盘进入胎儿的身体中，影响骨骼发育和大脑发育，胎儿日后会存在身体缺陷，甚至是大脑智障。这主要是由于铅导致了孩子的DNA发生异变，也就是甲基化模式发生改变，影响孩子的正常发育，而改变后的基因还会因为遗传而传递给后代，导致孩子身体出现伤害。

通常认可的重金属分析方法有：紫外分光光度法(UV)、原子吸收法(AAS)、原子荧光法(AFS)、电感耦合等离子体法(ICP)、X荧光光谱(XRF)、电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)。这些检测方法均需配套大型的检测仪器，这些仪器虽然能精确检测样本中的重金属含量，但也存在很大的缺点：一方面这些仪器均价格昂贵，仪器维护成本高，加上配套的耗材价格贵，这样重金属检测的综合成本较高，另外一方面检测过程中需要每次定标，操作步骤复杂，不能满足样本大批量检测及现场检测的需求，这些缺点均限制了重金属检测的大规模开展。

免疫检测方法是基于抗原、抗体的特异性识别和结合反应的分析方法，通过对抗原或抗体进行标记(酶、荧光物质、放射性同位素标记等)，利用标记物的信号放大作用，与现代测试技术相结合，对样品中特定的目标物进行一定的目标物进行定性定量测定。其具有以下几个优点：

1)特异性强、灵敏度高；

2)方法便捷、分析容量大、检测成本低；

3)可提供系列化的产品以及技术，产品可以商业化。

免疫检测方法目前已得到了大规模应用，但是主要运用在蛋白类标记物的检测分析过程中，基于蛋白类物质分子量大，相应的抗体通过业已成熟的单克隆抗体或多克隆抗体制备技术容易制备获得；由于重金属物质分子量小，其本身并没有免疫原性，因此重金属的单抗或多抗十分难以获得。近年，研究人员通过把重金属鳌合在乙二胺四乙酸二钠(EDTA)或其衍生物上，再将该鳌合物和牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)或钥孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联后再免疫相应的宿主，进而制备出针对重金属-EDTA或重金属-EDTA螯合物的抗体，为免疫方法检测重金属打下了基础。此法制备的抗体是针对鳌合在EDTA或其衍生物的重金属，因此在检测过程中，需要将样本中的重金属先和EDTA或其衍生物鳌合后，再在试剂条上进行检测。这种样本的前处理过程是重金属检测区别于常规的蛋白类物质检测的不同之处。