[发明专利]一种重金属荧光免疫检测方法及其层析试剂盒

权利要求书

1.一种重金属荧光免疫检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样品前处理：将血液样本进行酸化、螯合，然后加入碱性溶液中和；

2)抗体荧光微球的制备：将含有修饰基团的荧光微球与重金属特异性抗体按10:(0.01-2)的重量比配成浓度为0.02-10μg/mL的荧光微球溶液；

3)抗原的包被：将重金属的完全抗原包被在T线处，包被浓度为0.1-2.0mg/mL；以包被羊抗鼠抗体的C线作为质控，包被浓度为0.1-2.0mg/mL；

4)检测：将步骤1)处理后的血液样本与步骤2)得到的荧光微球溶液反应，后加入步骤3)得到的包被有检测线T和质控线C的试剂条上，用荧光检测仪检测，通过标准曲线计算浓度值。

2.如权利要求1所述的重金属荧光免疫检测方法，其特征在于，步骤1)的具体操作是：将血液样本利用无机酸溶液和EDTA或其衍生物的混合液进行酸化和螯合剂处理，再加入氢氧根离子浓度为0.1-1mol/L的无机碱溶液进行中和，离心，取上清；其中，无机酸溶液的浓度为0.1-1mol/L，EDTA或其衍生物的浓度为0.001-0.05mol/L，加入混合液的量为样本的1-50倍。

3.如权利要求1所述的重金属荧光免疫检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述荧光微球的大小为50-500nm；所述修饰基团为羧基、氨基、巯基、羟基、醛基或酰肼基，荧光微球与重金属抗体的结合方式为共价结合或吸附结合。

4.如权利要求1所述的重金属荧光免疫检测方法，其特征在于，步骤3)中，所述重金属为铅、镉、铬、砷、汞、镍、钴或铝。

5.如权利要求1所述的重金属荧光免疫检测方法，其特征在于，步骤3)缓冲液为PBS缓冲液或TRIS缓冲液。

6.如权利要求1所述的重金属荧光免疫检测方法，其特征在于，步骤3)缓冲液中含有0.1-10％的蔗糖或海藻糖。

7.如权利要求1所述的重金属荧光免疫检测方法，其特征在于，步骤4)中，标准曲线的绘制方法如下：

I)标准溶液的配制：将重金属标准样品用小牛血清稀释成系列浓度；

II)标准溶液的酸化：分别取系列浓度的标准溶液，用10-30倍体积的0.3-0.6mol/L的硝酸或盐酸和0.001-0.01mol/L的EDTA或其衍生物的混合溶液，酸化螯合5-20min，再滴加0.3-0.6mol/L的氢氧化钠或氢氧化钾溶液中和，离心，取上清；

III)反应：取步骤II)处理后的标准溶液和荧光微球溶液反应2-6min后，加至包被有完全抗原T线和羊抗鼠抗体的C线的试剂条上；

IV)制作标准曲线：检测T线和C线的荧光强度，以标准溶液的浓度对数为横坐标，以T/C荧光信号强度之比函数的对数为纵坐标，拟合制作双对数Logit-Log标准曲线。

8.一种重金属荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，包括试剂条、荧光微球溶液、样本前处理液Ⅰ和样本前处理液Ⅱ；所述试剂条包括底板和复合于底板上的样本垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述硝酸纤维素膜上通过缓冲液包被有检测线T和质控线C，检测线T包被待检重金属的完全抗原，质控线C上包被有羊抗鼠抗体；所述缓冲液为含有蔗糖或海藻糖的PBS或TRIS缓冲液；

所述荧光微球溶液是由含有修饰基团的荧光微球与重金属特异性抗体按10:(0.01-2)的重量比配成的浓度为0.02-10μg/mL的溶液；

所述样本前处理液Ⅰ是包含有起酸化作用的硝酸或盐酸和起螯合作用的EDTA及其衍生物的混合溶液；

所述样本前处理溶液Ⅱ是起中和作用的氢氧化钠或氢氧化钾无机碱溶液。

9.如权利要求8所述的重金属荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述检测线T的包被浓度为0.1-2mg/mL；所述质控线C的包被浓度为0.1-2mg/mL。

10.如权利要求8所述的重金属荧光免疫层析试剂盒，其特征在于，所述样本垫和吸水垫分别搭接于所述硝酸纤维素膜的两端，且各有0.1-0.5cm的搭接长度。