[发明专利]一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法

说明书

本发明涉及一种HSCCC‑DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法，其包括以下步骤：1）样品准备；2）HSCCC流动相与固定相准备；3）DPPH流动相溶液准备；4）HSCCC‑DPPH系统的平衡与连接；5）样品的分析及分离。上述的一种HSCCC‑DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法，设计合理，通过该方法能够实现对麦冬（包括块根、须根等不同植物部分）中清除DPPH活性成分的高异黄酮在线检测分析及分离。

技术领域

本发明涉及天然药物技术领域，具体涉及一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法。

背景技术

麦冬来源于百合科沿阶草属多年生常绿草本植物Ophiopogon japonicus，其干燥块根为传统常用中药之一，应用已有上千年的历史；具有养阴生津，润肺清心的功效；主治肺燥干咳、阴虚痨咳、喉痹咽痛、津伤口渴、内热消渴、心烦失眠、肠燥便秘等。

目前，已经从麦冬植物包括块根、须根等不同部分中鉴定了多种高异黄酮、甾体皂苷以及多糖成分。其中麦冬高异黄酮是一类重要的小分子活性成分，它们大都有清除DPPH（2,2-联苯基-1-苦基肼基）自由基、超氧阴离子、H₂O₂及·OH等抗氧化活性，同时具有抗肿瘤、抗炎、抑制磷酸化、抗雌激素、抗诱变、镇咳、抗真菌、诱导血管舒张和肝细胞保护等多方面的生物活性和作用。

传统的抗氧化活性成分筛选方法，一般需要先采用硅胶柱层析、凝胶层析以及制备液相色谱等方法从粗提物获得单体化合物，然后再通过抗氧化活性试验鉴定活性成分。以上方法实验方案复杂、耗时长，操作繁琐、费时费力，同时容易造成漏筛等问题。此外，以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除法为代表的活性检测技术多在离线情况下进行，效率较低，优势未能充分发挥。

高速逆流色谱（HSCCC）一种基于液-液分配机理的新型色谱分离纯化技术。它不用任何固态的支撑物或载体，而是利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡。其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，从而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的快速分离。然而单纯使用HSCCC并不能有效分析被分离各组分的活性，仍需要进一步对其中的化学成分进行活性测试。随着现代色谱联用技术的发展，利用多种色谱联用可以实现在线活性成分分析以及分离。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法的技术方案。

所述的一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）样品准备

取麦冬的粗提物或乙酸乙酯萃取物或经初步分离的化学部位，用旋转蒸发仪蒸干除去溶剂，得到浓缩后的样品，备用；

2）HSCCC流动相与固定相准备

选择合适HSCCC两相溶剂体系，按体积比及先后顺序将溶剂加入分液漏斗，振摇，使溶剂混匀，静置过夜上相为流动相，下相为固定相，超声脱气20min，静置至室温，备用；

3）DPPH流动相溶液准备

精密称取DPPH，用色谱甲醇定容于容量瓶，摇匀溶解，用微孔滤膜过滤，滤液装入棕色瓶，超声脱气15min，静置至室温，备用；

4）HSCCC-DPPH系统的平衡与连接