[发明专利]一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法

权利要求书

1.一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）样品准备

取麦冬的粗提物或乙酸乙酯萃取物或经初步分离的化学部位，用旋转蒸发仪蒸干除去溶剂，得到浓缩后的样品，备用；

2）HSCCC流动相与固定相准备

选择合适HSCCC两相溶剂体系，按体积比及先后顺序将溶剂加入分液漏斗，振摇，使溶剂混匀，静置过夜上相为流动相，下相为固定相，超声脱气20min，静置至室温，备用；

3）DPPH流动相溶液准备

精密称取DPPH，用色谱甲醇定容于容量瓶，摇匀溶解，用微孔滤膜过滤，滤液装入棕色瓶，超声脱气15min，静置至室温，备用；

4）HSCCC-DPPH系统的平衡与连接

以10～20mL/min 的流速往HSCCC仪中泵入固定相，待管路完全充满固定相后以600～1000rpm转动主机，同时以1～3mL/min 的速度泵入流动相，至HSCCC系统平衡；应用输液泵入DPPH溶液至检测器基线平衡；用连接管连接HSCCC和输液泵，HSCCC流动相经检测器1流出后，与输液泵入DPPH溶液在线混合，再进入检测器2分析，直至HSCCC和DPPH各自所对应的检测器基线平衡，所用设备为的高速逆流色谱仪、输液泵和2台紫外-可见光谱分析检测系统的联用设备；

5）样品的分析及分离

将样品用高速逆流色谱选用溶剂系统溶解，滤膜过滤，通过HSCCC主机进样系统进样，通过2台检测器监测可以实现对麦冬活性成分的在线分析；如果需要分离获得相对应的活性成分，则断开HSCCC-DPPH连接，再次进样后根据HSCCC图谱收集相应峰位置流动相，蒸干即得；或者在HSCCC流动相进入检测器之前连接一个可调节分液器，一部分液体进入HSCCC检测器分析而后与输液泵入的DPPH溶液混后进入液相检测器，另一部分可以同步收集流动相，实现活性成分的同步分析与分离。

2.如权利要求1所述的一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法，其特征在于所述的步骤1）中以麦冬块根或须根为原料，采用乙醇或甲醇提取获得麦冬的粗提物；以麦冬块根或须根为原料，经过乙酸乙酯萃取获得乙酸乙酯萃取物；以麦冬块根或须根为原料，经过大孔树脂或硅胶柱层析得到初步分离的化学部位。

3.如权利要求1所述的一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法，其特征在于所述的步骤2）中所述的HSCCC两相溶剂体系为正己烷∶乙酸乙酯∶乙醇∶乙腈∶水V/V/V/V/V=1～2.5:1～2.5: 1～1.5:0～1.5:1～1.5的溶液体系；正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶乙腈∶水V/V/V/V/V=1～6:1～3:1～3:0～3:1～2的溶液体系。

4.如权利要求1所述的一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法，其特征在于所述的步骤3）中所述的DPPH溶液浓度为0.05～1mmol/L。

5.如权利要求1所述的一种HSCCC-DPPH联用在线活性分析及分离麦冬高异黄酮的方法，其特征在于所述的步骤4）中检测器1检测波长285nm，检测器2检测波长517nm。