[发明专利]一种激肽释放酶注射液

说明书

本发明提供了一种激肽释放酶注射液，所述的注射液中含有：(1)激肽释放酶0.1‑10PNA单位/mL；(2)缓冲液5‑50mM，pH＝6.0‑7.0；(3)渗透压调节剂0.1‑5％，w/v(以注射液制剂的总体积为基准)；(4)蛋白酶保护剂0.001‑10％，w/v(以注射液制剂的总体积为基准)。本发明提供含有激肽释放酶的注射液中不含防腐剂，不会因为防腐剂的使用使蛋白酶的活性降低，并且得到的注射液稳定性依然很高；本发明提供的激肽释放酶注射液的制备方法，所用配方简单，操作简便，成本低，不污染环境，使用特定的蛋白酶保护剂并调节各成分的比例，使制备的注射液稳定性高、杂质少、副作用低，安全性高，适合大批量生产。

技术领域

本发明涉及生物制剂领域，更具体地涉及稳定的激肽释放酶注射液。

背景技术

激肽释放酶是一组存在于多数组织和体液中的丝氨酸蛋白酶，是一种肽链内切酶。它特异性的在碳末端切割底物肽，可裂解激肽原释放具有活性的激肽，由激肽发挥扩张毛细血管、松弛血管平滑肌、改善微循环、抗凝、溶血栓、降低血液粘度和血压，以及具有治疗不孕不育症等作用。其英文名为Kallikrein与Kininogenase、Kallidinogenase、Kininogenin所描述的都是同一类成分。目前已经从人和动物体的不同组织、器官或尿液中获得许多Kallikrein类成分，其中将含量最高，发现也最早的命名为Kallikrein-1(激肽释放酶-1)。该成分在人或哺乳动物的胰腺和肾脏中含量最高，其代谢后又通过肾脏，随尿排出体外。因此，从人或动物尿中分离出来的早年所称的尿激肽原酶(或尿激肽释放酶)实际上就是新分类中的激肽释放酶(Kallikrein)。不同来源的激肽释放酶，其分子量差别很大。例如，从人尿中或胰腺中分离出的人激肽释放酶，其分子量为33800。而通过基因方法获得的重组人激肽释放酶的分子量从26000-35000不等，这主要取决于采用的表达方式(E.cli、酵母、昆虫细胞、CHO细胞等)以及表达的方式(细胞内或分泌表达)等不同，蛋白糖基化的修饰方式、修饰程度不同以及纯化方式对糖链影响等引起的差异。例如，E.cli或酵母细胞内表达出的激肽释放酶其分子量约为26000，而CHO细胞表达的激肽释放酶可达到35000左右。本发明中的激肽释放酶可以使天然提取或重组的，可以是尿激肽原酶或胰激肽原酶，优选地是重组激肽释放酶。

目前激肽释放酶制剂主要有两种形式，注射液制剂和冻干粉制剂。这两个形式的制剂各有利弊。

冻干粉制剂脱去了水分，活性成分和辅料以干粉状态存在，其稳定性相对于注射液制剂更高，因此易于保存运输。例如，中国专利申请200910131861中公开了一种用甘露醇、柠檬酸钠与人尿激肽原酶制成注射液，已达到保持主药活性的作用。然而注射液制剂在制备过程中需要加入大量辅料，例如赋形剂、防腐剂保护剂等等。一方面大量辅料可能会成为潜在过敏原，引起各种不良反应。按照WHO国际药物监测合作中心的规定，药物不良反应(Adverse Drug Reactions，ADR)指正常剂量的药物用于预防、诊断、治疗疾病或调节生理机能时出现的有害的和与用药目的无关的反应。目前关于激肽释放酶注射液不良反应的报告主要为：心脑血管系统不良反应(例如皮肤潮红、血压下降、结膜充血、胸闷、伴发心绞痛等)、神经系统不良反应(头痛、出汗、头晕、乏力)、消化系统不良反应(恶心、呕吐、腹泻、上消化道出血)、全身性不良反应(发热等)以及其他不良反应(剧烈咳嗽、皮疹等)。也曾出现过严重的不良反应报告，例如梗死灶内出血，甚至患者死亡。上述药物不良反应可能会引起用药者的身体不适，甚至致使病情恶化，引发新的疾病。另一方面，注射液制剂在使用时需要进行复溶，复溶需要一定的时间，且复溶效果的好坏直接影响了药物的疗效，因此对于一些需要紧急用药的病例而言，注射液针剂稍显不便。