[发明专利]一种芦笋茎枯病菌LAMP检测引物组及其检测方法

权利要求书

1.一种芦笋茎枯病菌LAMP检测引物组，其特征在于：所述的芦笋茎枯病菌LAMP检测引物组由正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP和反向内引物BIP组成，各引物的核苷酸序列为：

F3：5’-ACATTGCGCCCTCTGGTAT-3’；

B3：5’-CCTACCTGATCCGAGGTCAA-3’；

FIP: 5’-GAAAGCAGTGCCCCAACACCA-CATGCCTGTTCGAGCGTC-3’；

BIP: 5’-GGACCCCGAGCGCAGTAGTTA-AGTTGGGGGTTTAACGGC-3’。

2.一种芦笋茎枯病菌LAMP检测方法，其特征在于：利用权利要求1所述的芦笋茎枯病菌LAMP引物组进行LAMP反应，LAMP反应体系为25 uL，反应体系包括0.2 mmol/L的F3和B3，1.6 mmol/L的FIP和BIP，Bst DNA聚合酶为8 U，DNA模板50～100 ng，12.5 uL的LAMP反应混合液，用无菌的超纯水补足25 uL；LAMP反应条件为63-65℃温育45-60 min，85℃灭活5-10min；所述LAMP反应混合液含40 mM Tris-HCl，20 mM(NH₄)₂SO₄，20 mM KCl，16 mM MgSO₄，1.6 mol/L 甜菜碱，2.0 mM dNTPs，0.2% Trion X-100。

3.根据权利要求2所述的一种芦笋茎枯病菌的LAMP检测方法，其特征在于：待LAMP反应结束后，在LAMP反应的扩增产物中加入显色剂SYBR green I 1.0 uL，显色结果观察到绿色荧光的判断为阳性，橙色或橘黄色判断为阴性，或采用琼脂糖凝胶电泳法判断检测结果，取2.0 uL LAMP扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测，出现梯形条带判断为阳性，没有出现梯形条带则判断为阴性。

4.如权利要求1所述的芦笋茎枯病菌LAMP检测引物组在芦笋茎枯病的早期诊断和病菌监测和鉴定中的应用。

5.如权利要求2所述的芦笋茎枯病菌LAMP检测方法在芦笋茎枯病的早期诊断和病菌监测和鉴定中的应用。