[发明专利]改进液体培养基的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及改进液体培养基的制备方法。

背景技术

肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae)于1881年首次由巴斯德分离出，是大叶性肺炎、脑膜炎、支气管炎的主要致病源之一，它也能引起中耳炎、鼻窦炎和菌血症等。肺炎链球菌感染是在全球范围内引起死亡的重要原因之一。美国有资料显示，估计每年有40～50万人患肺炎球菌性肺炎，病死率为5％～10％。在用疫苗可预防儿童死亡的疾病中，肺炎链球菌引起的疾病排名第一。随着抗菌素的大量使用，耐药菌株与日俱增，医学界再次关注疫苗的研发。肺炎球菌目前已发现90多种血清型。其细菌表面荚膜具有抗原性，再将肺炎球菌多糖共价连接到载体蛋白使之成为胸腺依赖性(TD)抗原，能够对婴幼儿和老人产生抗体，免疫效果有效提高。现有疫苗均是提取其荚膜多糖为原料制得。

自肺炎疫苗研发以来，由于其荚膜多糖产量较低，只有通过尽量扩大生产规模，以达到提高多糖产量的目的，因此生产成本较高。提高多糖产量可从筛选优质菌种、优化发酵工艺、优化纯化工艺等关键工序着手。筛选荚膜较厚的菌种，即是关键工艺之一，从源头上解决这一问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是现有培养基培养肺炎链球菌获得的荚膜多糖产量较低，目的在于提供改进液体培养基的制备方法，采用本发明培养基获得荚膜较厚的菌种，利于提高荚膜多糖的产量，提高生产效率，降低生产成本。

本发明通过下述技术方案实现：

改进液体培养基的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，称取以下原料：

溶剂为注射用水的相对用量为1000ml：

含氮源为：胰酪胨：15～80g，胰胨：20～70g，精选大豆胨：10～80g，大豆胨：10～80g，酸水解酪蛋白：10～70g，酵母提取物：15～40g，酵母浸粉：5～40g中的任意三种组合物；

碳源为：葡萄糖：5.0～50g；

盐类为：K₂HPO₄：0～12.0g，KCl：0～7.0g，Na₂HCO₃：0～5.0g，NaCl：3.0～10.0g， MgSO₄·7H₂O：0.4～5.0g，CaCl₂：0～0.14g；

微量元素为：L-半胱氨酸盐酸盐：0.12～1.80g，烟酸：0.5～1.2mg，腺嘌呤：5.5～10.5mg，FeSO₄：2.5～6.5mg；

步骤2，采用注射用水对上述原料依次进行溶解；

步骤3，将采用注射用水溶解后的混合溶液进行定容到所需体积，并调节pH值；

步骤4，除菌后获得液体培养基。

优选地，所述步骤2中，将所述原料均加入同一容器内，然后向盛由原料混合物的容器中在不断搅拌条件下加入注射用水；在添加完注射用水后，进行加热溶解。

优选地，所述加热溶解步骤为：先以1℃/min的升温速率由25℃升温至30℃，在30℃温度条件下保持10min，然后以1℃/min的升温速率由38℃升温至35℃，在38℃温度条件下保持5min。

优选地，所述步骤3中，采用质量浓度为10％的NaOH溶液调节pH值至7.0～7.8。

优选地，在无菌操作条件下经0.1μm的过滤减压过滤除菌。

优选地，称取各原料的组成为，溶剂为水的相对用量为1000ml：

含氮源为：胰酪胨：55g，胰胨：50g，精选大豆胨：50g，大豆胨：45g，酸水解酪蛋白： 45g，酵母提取物：28g，酵母浸粉：25g中的任意三种组合物；

碳源为：葡萄糖：25g；

盐类为：K₂HPO₄：6.5g，KCl：4.5g，Na₂HCO₃：2.5g，NaCl：6.0g，MgSO₄·7H₂O：2.6g， CaCl₂：0.09g；

微量元素为：L-半胱氨酸盐酸盐：1.12g，烟酸：0.9mg，腺嘌呤：8.5mg，FeSO₄：4.0mg。

本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果本发明改进液体培养基的制备方法，

本发明提供了改进液体培养基的制备方法，。

具体实施方式