[发明专利]基于荧光定量PCR检测银鲳的引物和探针及其试剂盒与方法

权利要求书

1.一种基于荧光定量PCR检测银鲳的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针包括上游引物FP、下游引物BP、探针Probe，其核苷酸序列分别如下所示：

FP：5’-GCCTATTTACCCAGTTTTC-3’；

BP：5’-GGTCAGGATCTCATTGTA-3’；

Probe：5’-FAM-TCATTCCGAGCAGCCTAGTAGC-TAMRA-3’，其中5’端标记的荧光基团是FAM，3’端标记的淬灭基团是TAMRA。

2.如权利要求1所述的基于荧光定量PCR检测银鲳的引物和探针，其特征在于：扩增反应时，FP引物、BP引物和探针的摩尔比为：2：2：1。

3.一种基于荧光定量PCR检测银鲳的试剂盒，其特征在于，试剂盒包含权利要求1或2中所述的检测引物和探针。

4.根据权利要求3所述的基于荧光定量PCR检测银鲳的试剂盒，其特征在于，还包括以下成分：（1）PCR MIX反应液；（2）去离子水；（3）阳性对照和阴性对照；所述的PCR MIX反应液含有：5U Taq酶，2.5mM dNTPs，25mM MgCl₂，2×PCR buffer。

5.一种基于荧光定量PCR检测银鲳的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）待检样品DNA的提取；

（2）荧光定量PCR反应体系的配制：将步骤（1）中提取的待检样品DNA加入荧光定量PCR反应体系，混匀后离心，所述荧光定量PCR反应体系中含有如权利要求1或2中所述的引物和探针；

（3）荧光定量PCR反应：设置阳性对照和阴性对照，将配好的荧光定量PCR反应体系置于荧光定量PCR仪后开始反应，反应程序如下：95℃反应10min；95℃反应15sec，60℃反应60sec，45个循环，每循环延伸结束时收集荧光信号；

（4）结果判断：通过观察荧光定量PCR的扩增曲线判断扩增结果。

6.如权利要求5所述的基于荧光定量PCR检测银鲳的方法，其特征在于：荧光定量PCR反应体系为25 µL反应体系，其含有10µmol/L FP和BP引物各1µL，10µmol/L探针0.5µL，PCRMIX反应液12.5µL，模板5µL，用去离子水补齐到25µL；所述的PCR MIX反应液含有：5U Taq酶，2.5mM dNTPs，25mM MgCl₂，2×PCR buffer。