[发明专利]一种黑皮鸡枞菌母种的快速扩繁方法

说明书

技术领域

本发明属于鸡纵菌培养技术领域，具体涉及一种黑皮鸡枞菌母种的快速扩繁方法。

背景技术

黑皮鸡纵菌学名烟灰鸡纵菌，属于鸡纵菌的一种，由于鸡纵菌肉质细嫩、气味浓香、味道鲜美且具有补气益血、益胃等功效，因此野生黑皮鸡纵菌已难以满足市场需求，人们开始人工大规模培养。但黑皮鸡纵菌的大规模生产离不开母种的扩大繁殖。母种是鸡纵菌生产的基础，优质复壮的母种是鸡纵菌高产栽培的先决条件。而现有技术中通常采用传统的一点式接种方法，发菌时间偏长，既影响生产，又因菌龄长、菌丝弱，造成再次扩繁时菌种活性下降，因此对于黑皮鸡纵菌的人工培养必须要改进母种的接种方法。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种操作方法简易、接种速度快、发菌时间短、提高菌丝品质的黑皮鸡枞菌母种的快速扩繁方法，以解决现有技术中黑皮鸡枞菌人工培养过程中母种接种速度慢、菌丝生长慢、品质差的问题。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：一种黑皮鸡枞菌母种的快速扩繁方法，包括以下步骤：

步骤1)：制备无菌水和试管斜面；

步骤1.1)：在三角瓶中加入水，瓶口用牛皮纸扎口；

步骤1.2)：培养基采用改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基，其组分包括马铃薯150g、可溶性酒精糟100-150g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g、琼脂20g、酵母浸膏2-3g、VB₁5-10mg、适量水；

步骤1.3)：将盛有水的三角瓶和盛有改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基的试管进行灭菌，灭菌后5min内将改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基摆成顶端距试管口30-50mm的斜面，摆成的斜面培养基长度130mm，将无菌水和改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基冷却后备用；

步骤2)：制备母种菌丝悬液；

选用组织分离培养的优质健壮的母种，在无菌条件下，用无菌移液管或注射器在被扩母种试管内注入无菌水，用接种针拌碎生长有被扩母种的培养基，制成母种菌丝悬液；

步骤3)：扩接；

在无菌条件下，用无菌移液管或注射器抽取母种菌丝悬液5mL，在每一支步骤1)制备的盛有改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基的扩接试管内注入0.05mL母种菌丝悬液摆平；

步骤4)：培养

将扩接试管放入恒温培养箱内恒温培养，培养温度稳定在22-28℃，培养6-8天菌丝即可长满130mm的试管斜面培养基。

进一步的，所述步骤1.2)中改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制备方法为：先将马铃薯洗净去皮，再称取150g切碎，加水1000mL文火煮沸20-30min后，用四层纱布过滤，再加入可溶性酒精糟100-150g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g、琼脂20g、酵母浸膏2-3g和VB₁ 5-10mg，继续加热搅拌混匀至琼脂融化，再补足水量至1000mL，在温度不低于70℃时将培养基分装至试管长度的1/4-1/5，试管口加梳棉塞，然后用牛皮纸在试管口棉塞外捆扎。

进一步的，所述步骤1.3)中灭菌过程为：将盛有水的三角瓶和盛有改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基的试管装入高压锅，0.11-0.12MPa下高压灭菌30min。

进一步的，所述步骤2)中母种的组织分离培养过程为从正在生长的黑皮鸡枞菌营养体上提取幼嫩的体细胞诱发愈伤组织，逐渐培养成菌丝体，并选取洁白、健壮的菌丝体作为母种。

本发明从正在生长的黑皮鸡枞菌营养体上提取幼嫩的体细胞诱发愈伤组织，逐渐培养成菌丝体，并选取洁白、健壮的菌丝体作为母种，增强了黑皮鸡纵菌菌丝体的质量。本发明选用的培养基在普通马铃薯葡萄糖琼脂培养基中加入DDS(可溶性酒精糟)，由于DDS中富含粗蛋白、粗纤维、有效磷、钾、钠及丰富的氨基酸，能够有效的加快菌丝的生长速度，且DDS一般为酸性，特别有利于鸡枞菌菌丝的生长。在培养过程中培养基经高压灭菌且全程无菌操作，培养的菌丝体无污染；在扩接培养过程中，接种速度快，5mL菌丝悬液可扩接100支母种，用时10-15min，可大幅度缩短黑皮鸡纵菌母种扩繁时的发菌时间。

与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：

本发明所需设备简单，操作方法简易，成本低廉，接种速度快，5mL菌丝悬液可扩接100支母种，用时10-15min，可大幅度缩短黑皮鸡纵菌母种扩繁时的发菌时间，菌龄短且一致，并且通过对培养基的改良，使得培养的菌丝体活力旺盛，为黑皮鸡纵菌的生产提供良好的基础，能使母种快速扩繁，满足黑皮鸡纵菌大规模生产所需的优质、复壮母种。

具体实施方式