[发明专利]一种黑皮鸡枞菌母种的快速扩繁方法

权利要求书

1.一种黑皮鸡枞菌母种的快速扩繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1）：制备无菌水和试管斜面；

步骤1.1）：在三角瓶中加入水，瓶口用牛皮纸扎口；

步骤1.2）：培养基采用改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基，其组分包括马铃薯150g、可溶性酒精糟100-150g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g、琼脂20g、酵母浸膏2-3g、VB1 5-10mg、适量水；

步骤1.3）：将盛有水的三角瓶和盛有改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基的试管进行灭菌，灭菌后5min内将改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基摆成顶端距试管口30-50mm的斜面，摆成的斜面培养基长度130mm，将无菌水和改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基冷却后备用；

步骤2）：制备母种菌丝悬液；

选用组织分离培养的优质健壮的母种，在无菌条件下，用无菌移液管或注射器在被扩母种试管内注入无菌水，用接种针拌碎生长有被扩母种的培养基，制成母种菌丝悬液；

步骤3）：扩接；

在无菌条件下，用无菌移液管或注射器抽取母种菌丝悬液5mL，在每一支步骤1）制备的盛有改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基的扩接试管内注入0.05mL母种菌丝悬液摆平；

步骤4）：培养；

将扩接试管放入恒温培养箱内恒温培养，培养温度稳定在22-28℃，培养6-8天菌丝即可长满 130mm 的试管斜面培养基。

2.根据权利要求1所述的黑皮鸡枞菌母种的快速扩繁方法，其特征在于，所述步骤1.2）中改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制备方法为：先将马铃薯洗净去皮，再称取150g切碎，加水1000mL文火煮沸20-30min 后，用四层纱布过滤，再加入可溶性酒精糟100-150g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g、琼脂20g、酵母浸膏2-3g和VB₁5-10mg，继续加热搅拌混匀至琼脂融化，再补足水量至1000mL，混合均匀，在温度不低于70℃时将培养基分装至试管长度的 1/4-1/5，试管口加梳棉塞，然后用牛皮纸在试管口棉塞外捆扎。

3.根据权利要求1所述的黑皮鸡枞菌母种的快速扩繁方法，其特征在于，所述步骤1.3）中灭菌过程为：将盛有水的三角瓶和盛有改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基的试管装入高压锅，0.11-0.12MPa下高压灭菌30min。

4.根据权利要求1所述的黑皮鸡枞菌母种的快速扩繁方法，其特征在于，所述步骤2）中母种的组织分离培养过程为从正在生长的黑皮鸡枞菌营养体上提取幼嫩的体细胞诱发愈伤组织，逐渐培养成菌丝体，并选取洁白、健壮的菌丝体作为母种。