[发明专利]一种磁微粒化学发光定量检测GFAP的试剂盒及其制备方法

说明书

本发明涉及医学体外诊断领域，具体涉及一种磁微粒化学发光定量检测GFAP的试剂盒及其制备方法，本发明提供的一种磁微粒化学发光定量检测GFAP的试剂盒，包括磁分离试剂、抗体试剂、酶标试剂、底物、洗液、校准品、质控品、磁套和吸头。本发明还公开了上述试剂盒的制备方法。本发明所述试剂盒能够提高检测上限、反应速度和检测结果的灵敏度。

技术领域

本发明涉及医学体外诊断领域，具体涉及一种磁微粒化学发光定量检测GFAP的试剂盒及其制备方法。

背景技术

胶质纤维酸性蛋白(GFAP)是中枢神经系统星形胶质细胞(AS)胞质内特异性酸性蛋白，被认为是AS的特有标志物，其在维持AS的形态和功能都具有作用。近年来研究发现血清及脑脊液GFAP水平在神经系统疾病的诊断、治疗及预后方面有重要的指导意义。例如血清GFAP在外伤性颅脑损伤(TBI)中升高，对TBI的早期诊断、鉴别诊断和判断预后有重要意义；急性缺血性脑卒中患者的血浆GFAP水平明显高于健康对照，且与患者的脑梗死体积间有明显相关性，GFAP水平越高，患者的神经缺损程度越高；阿尔兹海默病(AD)中AS增生是非常突出的中枢神经病理变化，众多研究报道AD患者刮氨酸化或氧化的GFAP升高，而且AD脑脊液中的GFAP水平与年龄呈正相关。

检测GFAP的技术有半定量的免疫印迹、免疫组织化学方法；定量的酶联免疫吸附(ELISA)、质谱法、基于荧光的多重技术等。其中定量检测技术由于其量化结果的特点，在临床指导意义上优于半定量检测技术。在定量检测技术中，ELISA方法相对于其他方法具有检测时间短、检测成本低的优点，市场上的GFAP检测试剂盒绝大部分均采用ELISA的检测方法。本试剂盒采用磁微粒化学法检测与现有技术相比，在检测时间，灵敏度上具有大大提高。

例如，中国专利申请号201110306638.4公开了一种聚苯乙烯微球定量检测人血清中GFAP浓度的试剂盒，由96孔过滤板、标准品、样品稀释液、表面已偶联有抗-GFAP抗体的聚苯乙烯微球、微球储存液、酶结合物、底物A、底物B、20×洗涤液、不干胶封片和使用说明书组成。本发明中的试剂盒将固相载体由传统的微孔板改为聚苯乙烯微球，抗原抗体的反应发生在液相中，不仅有利于二者保持生物活性和正确的空间构象，还可消除传统反应模式的表面张力和空间障碍对抗原抗体反应的影响，以上两点均有利于二者之间的反应，可以有效缩短反应时间与洗涤次数，同时该发明具有操作简单、灵敏度高、特异性好、成本低的特点，对急性脑出血早期病情程度的诊断具有重要的临床意义。但是该发明定量检测是依据酶HRP和底物反应显色强弱来判断，通过色差的分辨灵敏度较低，影响定量检测的灵敏度。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明提供一种磁微粒化学发光定量检测GFAP的试剂盒，能够实现GFAP准确和高精确地定量测定。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

所述试剂盒包括：磁分离试剂、抗体试剂、酶标试剂、底物、洗液、校准品、质控品、磁套和吸头；

所述磁分离试剂为1个含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶；

所述抗体试剂为1个含有生物素标记的抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶；

所述酶标试剂为1个含有碱性磷酸酶标记的抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶；

所述底物为1个含有光泽精的Tris缓冲液瓶；

所述洗液为1个含有吐温-20、NaCl的Tris缓冲液瓶；

所述校准品包括2个液体校准瓶，所述液体校准瓶内目标浓度分别为0.2ng/ml、25ng/ml的GFAP抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；

所述质控品包括1个质控瓶，所述质控瓶内为5ng/ml的GFAP抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；

所述磁套为1个保护磁棒避免污染的塑料管；