[发明专利]一种磁微粒化学发光定量检测GFAP的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种磁微粒定量检测GFAP的试剂盒，所述试剂盒包括：磁分离试剂、抗体试剂、酶标试剂、底物、洗液、校准品、质控品、磁套和吸头，其特征在于：

所述磁分离试剂为1个含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶；

所述抗体试剂为1个含有生物素标记的抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶；

所述酶标试剂为1个含有碱性磷酸酶标记的抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶；

所述底物为1个含有光泽精的Tris缓冲液瓶；

所述洗液为1个含有吐温-20、NaCl的Tris缓冲液瓶；

所述校准品包括2个液体校准瓶，所述液体校准瓶内目标浓度分别为0.2ng/ml、25ng/ml的GFAP抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；

所述质控品包括1个质控瓶，所述质控瓶内为5ng/ml的GFAP抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；

所述磁套为1个保护磁棒避免污染的塑料管；

所述吸头为1个转移200ul液体的塑料管。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒为羧基磁球。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒直径为1-10μm。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒直径为4μm。

5.如权利要求1所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：配制Buffer A溶液

配制1000ml Buffer A溶液，准确称取1.5601g NaH2PO4·2H2O，加入到纯水中，搅拌至完全溶解并定容至1000ml，用pH试纸测溶液pH值，确定pH值是否在5.9～6.1之间，如pH值超出5.9～6.1，用0.04M的NaOH或HCl进行调节至pH值范围之内，再用0.22μm的滤膜，对溶液进行过滤；

步骤2：配制Buffer B溶液

配制1000mlBuffer B溶液，准确称取0.0499g NaH2PO4·2H2O和0.6023g Na2HPO4·12H2O，加入到纯水中，搅拌至完全溶解并定容至1000ml，用pH试纸测溶液pH值，确定pH值是否在7.4～7.6之间，如pH值超出7.4～7.6，用0.04M的NaOH或HCl进行调节至pH值范围之内，再用0.22μm的滤膜，对溶液进行过滤；

步骤3：配制Buffer C溶液

配制1000mlBuffer C溶液，准确称取75.07g甘氨酸，加入到900ml的Buffer B中，搅拌至完全溶解并定容至1000ml，用pH试纸测溶液pH值，确定pH值是否在7.4～7.6之间，如pH值超出7.4～7.6，用0.04M的NaOH或HCl进行调节至pH值范围之内，再用0.22μm的滤膜，对溶液进行过滤；

步骤4：配制样本稀释液

配制1000ml样本稀释液，准确称取5.8747g NaCl、12.1141g Tris、50g BSA，加入到纯水中，搅拌至完全溶解并准确量取1ml Pc-300加入到上述溶液中，搅拌至完全溶解并定容至1000ml，用pH试纸测溶液pH值，确定pH值是否在7.3～7.5之间，如pH值超出7.3～7.5，用0.04M的NaOH或HCl进行调节至pH值范围之内，再用0.22μm的滤膜，对溶液进行过滤；

步骤5：配制通用稀释液

配制1000ml通用稀释液，准确称取5.8746g NaCl、12.1141g Tris、0.2042gMgCl2.6H2O、50g蔗糖、5g BSA，加入到一定量的纯水中，搅拌至完全溶解并准确量取1ml Pc-300和1ml吐温-20加入到上述溶液中，搅拌至完全溶解并定容至1000ml，用pH试纸测溶液pH值，确定pH值是否在7.9～8.1之间，如pH值超出7.9～8.1，用0.04M的NaOH或HCl进行调节至pH值范围之内，再用0.45μm的滤膜，对溶液进行过滤；

步骤6：配制磁分离试剂

配制1000ml的磁分离试剂，A瓶：用10ml Buffer A洗涤400mg的磁微粒，洗涤两次，再加入5ml Buffer A；B瓶：用400μL DMSO溶解400mg EDC和240mg NHS；C瓶：32mg SA溶于2mlbuffer B中；B瓶溶液加入A瓶，室温充分震荡反应10min，用10ml buffer A洗涤两次；3mlbuffer B加入A瓶重悬磁微粒，C瓶溶液加入A瓶，混匀，室温震荡反应1h；向A瓶加入800ulbuffer C终止5min，用10ml bufferB洗涤磁球三次，加入10ml通用稀释液；使用100ul～1000ul量程的移液器将A瓶溶液加入广口瓶，补加通用稀释液用量筒定容至溶液配制总量；

步骤7：配制抗体试剂

将0.5mg/ml生物素联抗体原液用样本稀释液稀释400倍，吸取溶液1ml生物素联抗体原液溶于399ml样本稀释液中稀释400倍，搅拌混匀，浓度为0.00125mg/ml。

步骤8：配制酶标试剂

将0.5mg/ml酶标抗体原液用样本稀释液稀释200倍，吸取溶液1ml生物素联抗体原液溶于199ml样本稀释液中稀释200倍，搅拌混匀，浓度为0.0025mg/ml。

步骤10：配制校准品

采用样本稀释液将GFAP抗原分别配制为0.2ng/ml、25ng/ml共2个浓度点；

步骤11：配制质控品

采用样本稀释液将GFAP抗原分别配制为5ng/ml。