[发明专利]一种小分子量的丝素肽的分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及纺织技术领域，尤其是涉及一种小分子量的丝素蛋白的分离方法。

背景技术

家蚕蚕丝是由家蚕合成与分泌的天然动物蛋白，来源广泛，其丝素蛋白具有良好的生物相容性，由20种人体可吸收的氨基酸组成，最终降解产物为氨基酸或小肽，易被细胞吸收或吞噬，不会引起明显的免疫反应，国内外大量的研究表明丝素蛋白材料能够支持多种细胞的生长，所以丝素蛋白是研发护肤品的理想原料。但作为护肤品，能否被皮肤吸收是非常重要的，这对丝蛋白分子量具有一定的要求。在本发明作出之前，对丝素蛋白特定分子量的精准分离报导极少。一些报导采用不同脱胶方法、调节丝素溶解温度或不同溶剂等方法制备大分子量丝素蛋白、分子量可控丝素蛋白、中分子量丝素蛋白，这些方法制备的丝素蛋白事实上还是分子量分布较宽的连续分布的混合溶液。不管如何脱胶或溶解，丝素溶解液均是由小分子量到大分子量连续分布的混合溶液，没有分离纯化出真正意义上的并且较精准小分子量范围的丝素蛋白。传统的酸或碱溶解法可以获得小分子量的丝素蛋白，这种方法对丝素的溶解不可控，虽然比起盐溶解法获得了小分子量，但是在丝纤维溶解的同时，会破坏部分氨基酸,极大地影响丝素蛋白分子的生物活性。上述这些已报导的采用溶液透析、滤膜过滤或酸碱溶解的方法获得的丝素溶液掺杂生物提取物，用于护肤品或食品具有异味。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种小分子量的丝素肽分离方法，本发明的方法制备得到了较窄分子量范围的多级别小分子量的丝素肽，同时亲水性更好，不会影响丝素蛋白分子的生物活性。

本发明提供了一种小分子量的丝素肽的分离方法，包括：

a)将家蚕蚕丝脱胶、加入中性盐溶液溶解，得到丝素蛋白溶解液；

b)将丝素蛋白溶解液加入平衡后的葡聚糖Sephadex G10柱中，用灭菌水洗脱丝素蛋白，收集流出液，得到脱盐的丝素蛋白水溶液；

c)将脱盐的丝素蛋白水溶液冻干，得到冻干后的丝素蛋白；

d)将冻干的丝素蛋白溶解液加入平衡后的葡聚糖Sephadex G50柱中，用灭菌水洗脱丝素蛋白，分管收集；

e)采用SDS-PAGE电泳或质谱筛选步骤d)收集管中1500Da以下的丝素肽，再次加入平衡后的葡聚糖Sephadex G15柱中，用灭菌水洗脱丝素肽，分管收集，分离1500Da以下的各级小分子量丝素肽。

优选的，步骤a)所述脱胶具体为采用碳酸钠、碳酸氢钠或生物酶进行脱胶。

优选的，步骤a)所述中性盐溶液选自溴化锂或氯化钙-乙醇；所述溶解时间为5～7小时；所述丝素蛋白溶解液浓度为10～50mg/mL。

优选的，步骤c)还可以为将脱盐的丝素蛋白水溶液倒入聚苯乙烯板内，60～100℃烘干得到丝素蛋白膜。

优选的，步骤c)所述冻干后还包括60～100℃热风干燥3～5h。

优选的，步骤c)后还包括将冻干后的丝素蛋白浸渍于去离子水中，收集溶解有丝素蛋白的水溶液，冻干，得到再次冻干的丝素蛋白。

优选的，所述浸渍的浴比为1:10mg/mL；所述浸渍的时间为1～30min。

优选的，所述冻干的丝素蛋白溶解液的浓度为30～80mg/mL。

优选的，步骤b)所述洗脱流速为200～400mL/h；步骤d)所述洗脱流速为30～160mL/h；步骤e)所述洗脱流速为8～10mL/h。

优选的，步骤e)所述1500Da以下的丝素肽的溶解液的浓度为10～50mg/mL。