[发明专利]一种小分子量的丝素肽的分离方法

权利要求书

1.一种小分子量的丝素肽的分离方法，其特征在于，包括：

a)将家蚕蚕丝脱胶、加入中性盐溶液溶解，得到丝素蛋白溶解液；

b)将丝素蛋白溶解液加入平衡后的葡聚糖Sephadex G10柱中，用灭菌水洗脱丝素蛋白，收集流出液，得到脱盐的丝素蛋白水溶液；

c)将脱盐的丝素蛋白水溶液冻干，得到冻干后的丝素蛋白；

d)将冻干的丝素蛋白溶解液加入平衡后的葡聚糖Sephadex G50柱中，用灭菌水洗脱丝素蛋白，分管收集；

e)采用SDS-PAGE电泳或质谱筛选步骤d)收集管中1500Da以下的丝素肽，再次加入平衡后的葡聚糖Sephadex G15柱中，用灭菌水洗脱丝素肽，分管收集，分离得1500Da以下的各级小分子量丝素肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)所述脱胶具体为采用碳酸钠、碳酸氢钠或生物酶进行脱胶。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)所述中性盐溶液选自溴化锂或氯化钙-乙醇；所述溶解时间为5～7小时；所述丝素蛋白溶解液浓度为10～50mg/mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)还可以为将脱盐的丝素蛋白水溶液倒入聚苯乙烯板内，60～100℃烘干得到丝素蛋白膜。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤c)所述冻干后还包括60～100℃热风干燥3～5h。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤c)后还包括将冻干后的丝素蛋白浸渍于去离子水中，收集溶解有丝素蛋白的水溶液，冻干，得到再次冻干的丝素蛋白。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述浸渍的浴比为1:10mg/mL；所述浸渍的时间为1～30min。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述冻干的丝素蛋白溶解液的浓度为30～80mg/mL。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b)所述洗脱流速为200～400mL/h；步骤d)所述洗脱流速为30～160mL/h；步骤e)所述洗脱流速为8～10mL/h。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤e)所述1500Da以下的丝素肽的溶解液的浓度为10～50mg/mL。