[发明专利]人粪便中脱落细胞核酸提取裂解液及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种人粪便中脱落细胞核酸提取裂解液，其特征在于，包括以下组分和用量：

异硫氰酸胍5mol/L，

金属离子螯合剂1mM～20mM，和

pH7.5～8.0的Tris-HCl缓冲溶液100mM，其中，

所述金属离子螯合剂选自乙二胺四乙酸和乙二胺四乙酸的水溶性盐中的至少一种，所述人粪便中脱落细胞核酸提取裂解液还包括表面活性剂，所述表面活性剂为非离子型去污剂，所述非离子型去污剂为2％Triton-100和3％Brij-35、为5％Triton-100和3％NP40、或者为5％Triton-100和4％Brij-35。

2.如权利要求1所述的人粪便中脱落细胞核酸提取裂解液，其特征在于，所述金属离子螯合剂是乙二胺四乙酸二钠。

3.如权利要求1所述的人粪便中脱落细胞核酸提取裂解液，其特征在于，所述Tris-HCl缓冲溶液的pH值为8.0。

4.一种如权利要求1所述的人粪便中脱落细胞核酸提取裂解液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在去离子水中加入所述金属离子螯合剂、所述缓冲溶液的缓冲物质和所述胍盐，并使各组分溶解混匀，从而得到混合物；

(2)调节所述混合物的pH至7.5～8.0；

(3)将所述表面活性剂加入到所述混合物中，混匀。

5.如权利要求1～权利要求3中任一项所述的人粪便中脱落细胞核酸提取裂解液在人粪便中脱落细胞核酸提取中的应用。

6.一种使用如权利要求1～权利要求3中任一项所述的人粪便中脱落细胞核酸提取裂解液从人粪便中提取脱落细胞核酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(A)将人粪便和粪便前处理液混合振荡，离心取上清液，其中所述粪便前处理液为含有20mM～100mM的NaCl、5％体积～10％体积的PVP和2％体积～5％体积的SDS以及pH5.5的150mM醋酸钠缓冲溶液；和

(B)在所述上清液中加入所述人粪便中脱落细胞核酸提取裂解液和蛋白酶K，混匀后加热裂解，从而得到细胞裂解液；

(C)在所述细胞裂解液中加入结合液和磁珠，混匀后室温静置使所述磁珠吸附所述细胞裂解液中的核酸，然后置于磁力架上室温静置，其中所述结合液为乙醇或异丙醇；和

(D)去除所述细胞裂解液，采用洗涤液洗涤所述磁珠，然后采用洗脱液将所述核酸从所述磁珠上洗脱下来。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述步骤(A)中，所述人粪便和所述粪便前处理液的体积比为1：5。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述步骤(B)中，所述上清液和所述人粪便中脱落细胞核酸提取裂解液等体积。