[发明专利]一种具有降血糖活性老鹰茶叶黄酮提取物的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于药品技术领域，具体涉及一种具有降血糖活性老鹰茶叶黄酮提取物的制备方法。

背景技术

老鹰茶含有黄酮、苷类、有机酸、香豆素和鞣质等成分，其中黄酮类是老鹰茶的主要成分，主要有山柰酚、山柰酚-葡萄糖菅及槲皮素-葡萄糖苷。研究结果表明老鹰茶能降低正常小鼠的血糖含量，提示其可通过刺激胰岛13细胞分泌胰岛素产生降糖作用。肾上腺素通过分解肝糖原使血糖升高，而老鹰茶降低肾上腺素性高血糖小鼠的血糖值，说明其可能具有抑制肾上腺素引起的肝糖原分解和促进肝糖原合成的作用，从而可减少血糖的来源，增加血糖的去路，明显降低代谢异常导致的血糖升高。四氧嘧啶和链脲佐菌素均为胰岛B细胞杀伤剂，可选择性地损伤胰岛B细胞，引起实验性糖尿病。在糖尿病小鼠和大鼠模型中，老鹰茶具有显著的降糖作用，同时对四氧嘧啶糖尿病小鼠血清中胰岛素的释放也具有促进作用。提示其主要通过保护胰岛p细胞或促进受损口细胞的修复以及促进胰岛素分泌、增加血清胰岛素含量而达到降低血糖的目的。

糖尿病是一种常见多发的代谢疾病，常伴有血脂的升高，而糖、脂代谢紊乱与糖尿病慢性并发症的发生发展密切相关。因此降低血脂对于阻止或延缓并发症、改善糖尿病患者的预后具有重大意义。毛细管电泳(Capillary electrophoresis,CE)是一种高效、快速和低耗的分离技术，非常适合分离一些在HPLC上没有保留或难于分析的成分，而且样品预处理相对比较简单，甚至不需考虑柱的损害问题，可用于测定植物的有机酸类化合物。对于常见的没有紫外吸收基团的有机酸类化合物，一般采用间接紫外法(indirect UV,IUV)测定，CE-IUV测定有机酸类化合物是一种快速简便的方法。老鹰茶(Litsea coreana Level)又名豹皮樟，俗称白茶，分布于四川、贵州、云南、安徽等地，是我国南方各民族民间长期饮用的一种植物代用茶，具有解毒消肿、明目益思、生津止渴、解表防暑等功效。本文以4,5–咪唑二羧酸(4,5-imidazolecarboxylic acid,IDC)为背景电解质，建立了一种快速、灵敏的分析有机酸类化合物的CE-IUV方法，该法还应用于老鹰茶中7种有机酸类化合物和黄酮的分析。

本发明采用4,5-咪唑二羧酸(IDC)为背景电解质，以20mmol/L IDC-0.5mmol/L十六烷基三甲基溴化铵(cetytrimethylammonium bromide,CTAB)电泳溶液(pH 12.1)，分离电压为–30kV，柱温为20℃，毛细管长95cm，分离测定了老鹰茶中七种有机酸类化合物(草酸、甲酸、柠檬酸、苹果酸、L-半胱氨酸、L-谷氨酸和乙酸)和黄酮的含量，该方法方法简便、快速、准确。

发明内容

本发明提供了一种具有降血糖活性老鹰茶叶黄酮提取物的制备方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：

(1)将新鲜老鹰茶叶清洗、烘干后粉碎并过20目筛，获得老鹰茶叶粉末，将老鹰茶叶粉末与水以质量比1:8～10混合后，在室温下搅拌浸泡广5小时，然后升温至85～100℃下加热回流浸提2～3h，冷却至30～50℃后过滤，获得滤液，即老鹰茶叶水提物；

(2)在步骤(I)获得的老鹰茶叶水提物中搅拌加入絮凝剂，在室温下静置4～6小时，然后离心，弃去沉淀，获得上清液a；所述絮凝剂为海藻酸钠、壳聚糖或羧甲基纤维素；

(3)将步骤(2)获得的上清液a减压浓缩后加入乙醇水溶液使乙醇体积终浓度为70～90％，静置12小时后，取上清液b减压浓缩至浓缩物无乙醇味，获得浸膏；

(4)将步骤(3)获得的浸膏加水配成混合液，再将混合液用萃取剂在50～80℃条件下搅拌30～90分钟进行萃取，萃取完全后冷却至30～40℃，静置分层，获得上层萃取液和下层萃余液，将上层萃取液减压浓缩至混合液体积的0.3～0.5倍，即得老鹰茶叶黄酮粗提液；所述萃取剂由有机溶剂A和有机溶剂B以体积比为1000:1混合组成，有机溶剂A为乙酸乙酯或乙酸乙酯与异丙醇以体积比5～9:1的混合溶液；有机溶剂B为乙酸；

(5)以IDC为背景电解质的毛细管电泳-间接紫外法测定老鹰茶中草酸、甲酸、苹果酸、柠檬酸、L-半胱氨酸、L-谷氨酸、乙酸和黄酮的含量。

作为优选手段，步骤(2)所述絮凝剂以质量浓度1～5％絮凝剂水溶液的形式加入，絮凝剂水溶液与老鹰茶叶水提物体积比为1～5:1000。

作为优选手段，步骤(2)所述絮凝剂以质量浓度1％絮凝剂水溶液的形式加入，絮凝剂水溶液与老鹰茶叶水提物体积比为2:1000。