[发明专利]用于伊马替尼相关基因C‑kit表达水平检测的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于伊马替尼相关基因C-kit表达水平检测的引物组，其特征在于，所述引物组包括分别针对C-kit基因和参考基因Actin的特异性引物及探针，其中：

C-kit-RF上游引物：

5’-CAGATTTCAGAGAGCACCAATCA-3’；

C-kit-RR下游引物：

5’-AATGGTCTACCACGGGCTTCT-3’；

C-kit-RP探针：

5’-FAM-TTACTCCAACTTAGCAAACTGCAGCCCCAA-TRAMA-3’；

Actin-RF上游引物：

5’-CCGACAGGATGCAGAAGGAG-3’；

Actin-RR下游引物：

5’-AGGATGGAGCCGCCGAT-3’；

Actin-RP探针：

5’-FAM-ATCAAGATCATTGCTCCTCCTGAGCGC-TRAMA-3’。

2.一种用于伊马替尼相关基因C-kit表达水平检测的试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液，所述PCR反应液包括针对C-kit基因和参考基因Actin的特异性引物及探针，其中：

C-kit-RF上游引物：

5’-CAGATTTCAGAGAGCACCAATCA-3’；

C-kit-RR下游引物：

5’-AATGGTCTACCACGGGCTTCT-3’；

C-kit-RP探针：

5’-FAM-TTACTCCAACTTAGCAAACTGCAGCCCCAA-TRAMA-3’；

Actin-RF上游引物：

5’-CCGACAGGATGCAGAAGGAG-3’；

Actin-RR下游引物：

5’-AGGATGGAGCCGCCGAT-3’；

Actin-RP探针：

5’-FAM-ATCAAGATCATTGCTCCTCCTGAGCGC-TRAMA-3’；

所述PCR反应液还包括PCR buffer、dNTP、HS Taq酶及超纯水。

3.根据权利要求2所述的用于伊马替尼相关基因C-kit表达水平检测的试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照品、阴性对照品和空白对照品。

4.根据权利要求3所述的用于伊马替尼相关基因C-kit表达水平检测的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品为含C-kit基因的溶液；所述阴性对照品为不含C-kit基因的溶液；所述空白对照品为超纯水。

5.一种用于伊马替尼相关基因C-kit表达水平检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：取待检测样本抽提mRNA，将样本mRNA进行逆转录得到cDNA，以cDNA作为模板；

步骤二：提供如权利要求4所述的试剂盒，取出适量PCR反应液，将所述PCR反应液与适量所述模板混匀；

步骤三：利用权利要求1所述的特异性引物和探针进行实时荧光定量PCR，记录Ct值，并分别以C-kit标准基因作为阳性对照构建标准曲线，根据样本的Ct值计算出样本的底物浓度；比较标准曲线上计算出正常样本与病变样本的底物浓度，最终判断待检测样本中的mRNA表达水平。

6.根据权利要求5所述的用于伊马替尼相关基因C-kit表达水平检测的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的反应条件为：95℃预变性5min；95℃15sec，60℃30sec，捕捉荧光信号，循环40次。