[发明专利]一种微生物发酵法生产L‑羟脯氨酸的方法

权利要求书

1.一种微生物发酵法生产L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：

步骤一：配置150mL摇瓶培养基于1000mL锥形瓶中，摇瓶培养基配方：酵母抽提物5g/L，蛋白胨10 g/L，氯化钠10 g/L，高压蒸汽灭菌柜内灭菌，121℃、0.1MPa灭菌20min，冷却至室温后，接种甘油管菌种，摇床培养；

步骤二：配置种子罐培养基15L于50L发酵罐内，种子罐培养基为：酵母抽提物6g/L，蛋白胨12 g/L，氯化钠10 g/L，消泡剂0.1 g/L，高温高压蒸汽灭菌保压0.1MPa、保温121℃维持15min，冷却至36℃，然后接摇瓶种子；

步骤三：配置20L发酵培养基于50L发酵罐内，高温高压蒸汽灭菌保压0.1MPa、保温121℃维持15min，冷却至36℃；

步骤四：种子罐培养结束后移种至灭菌冷却后的发酵罐内；

步骤五：发酵培养过程中搅拌转速与溶氧水平DO值相关联，搅拌转速与溶氧水平DO值关联通过发酵罐自动化控制系统实现，发酵过程中进行两阶段不同溶氧控制；

步骤六：发酵罐培养过程中进行两阶段不同温度控制，直至发酵结束，发酵液中L-羟脯氨酸量不再增加时，结束发酵。

2.如权利要求1所述的微生物发酵法生产L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，配置150mL摇瓶培养基于1000mL锥形瓶中，灭菌接种，摇床培养12h，摇床转速200rpm，温度36℃。

3.如权利要求1所述的微生物发酵法生产L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，摇瓶培养结束后培养液移至灭菌冷却后的种子罐，接种量为150ml，占种子罐料液体积1%，接种后调节种子罐转速250rpm，通气比3vvm，温度36℃，压力0.05MPa，培养时间4h。

4.如权利要求1所述的微生物发酵法生产L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，发酵罐培养基配方为：酵母抽提物12 g/L，甘油80 g/L，硫酸铵10 g/L，磷酸二氢钾4 g/L，硫酸镁2 g/L，氯化钠2 g/L，氯化钙0.2 g/L，氯化锌0.02 g/L，硫酸锰.0002 g/L，硫酸亚铁6 g/L，消泡剂0.6 g/L。

5.如权利要求1所述的微生物发酵法生产L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，移至发酵罐种量为5L，占发酵罐初始料液体积的25%，移种后调节发酵罐转速250rpm，通气比2vvm，温度初始值36℃，压力0.05MPa，校正溶氧水平初始DO值为100%。

6.如权利要求1所述的微生物发酵法生产L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，发酵罐培养过程中在周期0h～20h控制溶氧水平DO值为35%，20h后控制溶氧水平DO值为25%，直至发酵结束。

7.如权利要求1所述的微生物发酵法生产L-羟脯氨酸的方法，其特征在于，发酵罐培养过程中在周期0h～20h控制发酵温度为36℃，20h后控制发酵温度为33℃，直至发酵结束。