[发明专利]一种磷脂酶D的生产工艺以及磷脂酶D制品

说明书

技术领域

本发明涉及酶制剂领域，具体而言，涉及一种磷脂酶D的生产工艺以及磷脂酶D制品。

背景技术

磷脂酶(Phospholipase，PL)是广泛存在生物体内存在的能水解甘油磷脂的酶，根据磷脂酶水解甘油磷脂的位点(Richmond G.S.等，Int.J.Mol.Sci.2011，12:588-612)不同，可将磷脂酶分为磷脂酶A1(PLA1)、磷脂酶A2(PLA2)、磷脂酶B(PLB)、磷脂酶C(PLC)、磷脂酶D(PLD)以及溶血磷脂酶A(LysoPLA)，

PLA1能够水解二脂肪酰基磷脂的Sn-1位酰基酯键，产生溶血磷脂和脂肪酸。PLA2则是能够水解Sn-2位的酰基酯键，产生溶血磷脂和脂肪酸。PLB则是能水解二脂肪酰基磷脂的Sn-1位和Sn-2位的两个酰基酯键产生甘油磷酰胆碱和游离脂肪酸的磷脂酶，该酶也同时具有溶血磷脂酶的活性。PLC是能够水解甘油骨架和磷酸基之间的磷酸酯键产生二磷脂酰甘油和磷酸极性醇酯(如磷酸胆碱、磷酸乙醇胺、磷酸肌醇等)。PLD则是水解磷酸基和氨基醇之间的磷酸酯键生磷脂酸和氨基醇。溶血磷脂酶A则是指能够水解溶血磷脂的Sn-1位或Sn-2位的脂肪酰基酯键，产物是甘油磷酸胆碱和脂肪酸。

微生物具有生产周期短、生长条件简单、生产效率高等特点，利用微生物发酵获取磷脂酶一直是工业酶制剂领域研究的重点。

但是，采用现有发酵工艺获取磷脂酶存在诸多问题，例如磷脂酶产量低、磷脂酶酶活性不高、酶纯度低等。

发明内容

本发明的目的在于提供一种磷脂酶D的生产工艺，该生产工艺的产量高、所生产的磷脂酶D具有较高的酶活性。

本发明的另一目的在于提供一种由上述生产工艺所生产的磷脂酶D制品，该磷脂酶D制品具有较高的酶活性。

本发明是这样实现的：

一种磷脂酶D的生产工艺，其包括：发酵步骤；

上述发酵步骤包括：将具有生产磷脂酶D性能的链霉菌属菌株接种至液体发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；

其中，上述液体发酵培养基含有：葡萄糖4.5-5.5g/L、蛋白胨4.5-5.5g/L、酵母浸粉4.5-5.5g/L、柠檬酸三钠4.5-5.5g/L、KH₂PO₄1.8-2.2g/L以及MgSO₄ 0.48-0.52g/L，pH6.8-7.2。

一种磷脂酶D制品，其由上述的磷脂酶D的生产工艺制得。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供的磷脂酶D的生产工艺采用含有葡萄糖4.5-5.5g/L、蛋白胨4.5-5.5g/L、酵母浸粉4.5-5.5g/L、柠檬酸三钠4.5-5.5g/L、KH₂PO₄ 1.8-2.2g/L以及MgSO₄ 0.48-0.52g/L，pH6.8-7.2的发酵培养液对链霉菌属菌株进行发酵培养生产磷脂酶D，该生产工艺一方面通过发酵环节的液体发酵培养基和发酵参数进行优化配置，得到链霉菌属菌株发酵的最佳条件，另一方面对纯化环节进行优化，最大程度地实现从发酵液中提取磷脂酶D，该生产工艺不仅有效地提高了产量，且所生产出的磷脂酶D具有较高的酶活性。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的一种磷脂酶D的生产工艺以及磷脂酶D制品。进行具体说明。

一方面，本发明提供了一种磷脂酶D的生产工艺，其包括如下步骤：

发酵步骤；

发酵步骤包括：将具有生产磷脂酶D性能的褐色链霉菌(Streptomyces chromofuscus DSM 40273)接种至液体发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；

其中，液体发酵培养基含有：葡萄糖4.5-5.5g/L、蛋白胨4.5-5.5g/L、酵母浸粉4.5-5.5g/L、柠檬酸三钠4.5-5.5g/L、KH₂PO₄ 1.8-2.2g/L以及MgSO₄ 0.48-0.52g/L，pH6.8-7.2。