[发明专利]抗体测定

说明书

本发明涉及通过检测包含来自哺乳动物对象之体液的受试样品中的抗体来在所述哺乳动物对象中检测肝癌的方法，其中所述抗体是对选自MMP9、AIF1、EpCAM和CDKN1B的肿瘤标志物蛋白具有免疫特异性的自身抗体，所述方法包括：使所述受试样品与选自MMP9、AIF1、EpCAM和CDKN1B的肿瘤标志物抗原接触；以及确定与所述受试样品中存在的自身抗体结合的所述肿瘤标志物抗原的复合物的存在或不存在，其中所述复合物的存在指示肝癌的存在。本发明中还包括在哺乳动物中诊断和治疗肝癌的对应方法、预测对抗肝癌治疗之响应的对应方法、检测包含来自哺乳动物对象之体液的受试样品中的抗体的对应方法以及适合用于进行本发明方法的试剂盒。

技术领域

本发明一般地涉及抗体检测领域，并且特别地涉及用于检测包含患者体液之样品中与肝癌相关之自身抗体的测定。

背景技术

很多诊断、预后和/或监测测定依赖于检测特定疾病状态或疾病易感性的生物标志物。这样的生物标志物通常是特定疾病特征性的或与疾病易感性相关的蛋白质或多肽，并且通常用于检测癌症(包括肝癌)。

肝癌并且尤其是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全世界第六常见的癌症，而且其还是癌症死亡的第二常见原因。高死亡率由晚期诊断(通常是在转移之后)和已存在的肝疾病引起。晚期诊断是由于缺乏早期症状和用于诊断的影像学技术不是最佳的。

血液甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)水平的超声筛选和评估是目前最广泛使用的肝癌筛查工具。然而，其差的表现突显了用于肝癌的经改进早期检测/筛选测试的重大缺口。

明显的是，有效筛查肝癌存在的临床上可用的测试由于其可使肝癌得到早期诊断而受到欢迎。此外，对体液样品(例如，血液样品)进行的诊断测试相对于其他技术而言快速且相对不具有侵入性，从而提高筛查参与率。早期疾病检测开辟了副作用较不严重的更广泛范围的治疗选择。中期肝癌的当前治疗途径涉及全肝移植，并且较早地鉴定患有早期疾病的患者将减轻器官捐献者登记簿上的负担。

由于肝癌的比例在世界范围内提高，用于肝癌的经改进筛查测试在全世界将是有用的。目前，中国占所有HCC病例的约50％，而埃及也具有非常高的HCC比例。HCC在这些国家的高患病率被认为部分地是因为乙型肝炎(hepatitis B)在中国的高发病率和丙型肝炎(hepatitis C)在埃及的高患病率。乙型肝炎和丙型肝炎以及肝硬化、非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease)、酒精性肝病、威尔逊病(Wilson’s disease)、遗传性血色素沉着病(hereditary hemochromatosis)、自身免疫性肝炎、证实的黄曲霉毒素暴露(documented aflatoxin exposure)、血吸虫病和糖尿病是肝癌的已知风险因子。这些病症在世界范围内的患病率提高使得急需设计用于肝癌的快速且非侵入性的测试。

近年来，越来越明显的是，抗体(并且特别是自身抗体)可用作疾病或疾病易感性的生物标志物。自身抗体是针对个体免疫系统识别为外来的抗原的天然抗体，即使该抗原实际上来源于个体。其可作为循环游离自身抗体或以由与其靶蛋白结合之自身抗体组成的循环免疫复合物的形式存在于循环中。由“正常”细胞表达的野生型蛋白与由患病细胞或在患病过程期间产生的经改变蛋白质形式之间的差异在一些情况下可导致经改变蛋白质被个体的免疫系统识别为“非自身的”并因此在该个体中引发免疫应答。这可以是导致产生对经改变蛋白质具有免疫特异性的自身抗体的体液(即B细胞介导的)免疫应答。

就自身抗体产生而言测量个体针对肿瘤标志物蛋白之存在的免疫应答的测定提供直接测量或检测体液中的肿瘤标志物蛋白的替代方案。这样的测定实质上构成了肿瘤标志物蛋白之存在的间接检测。免疫应答的性质意味着，非常少量的循环肿瘤标志物蛋白可能以可引发自身抗体，并且依赖于检测针对肿瘤标志物蛋白的免疫应答的间接方法将因此比用于直接测量体液中肿瘤标志物蛋白水平的方法更灵敏。因此，基于自身抗体检测的测定方法在患病过程早期可具有特别的价值。