[发明专利]一种龙舌兰离体培养的方法

说明书

本发明公开了一种龙舌兰离体培养的方法，包括外植体处理、诱导培养、增殖培养和生根培养，选取龙舌兰珠芽作为外植体，对外植体进行洗净灭菌消毒处理后，接种于诱导培养基中培养获得龙舌兰愈伤组织，再将龙舌兰愈伤组织转接至增殖培养基中进行增殖培养，最后将分化出的长1‑2cm的丛生芽转接到生根培养基中培养获得生根龙舌兰，生根率达到100%。本发明通过对龙舌兰的茎尖进行诱导、增殖、生根，快速获得龙舌兰组培苗，生根快，缩短了龙舌兰组培时间，成本低，同时提高了龙舌兰成活、分化和生根率，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

技术领域

本发明涉及植物栽培技术领域，涉及一种龙舌兰离体培养的方法。

背景技术

龙舌兰（Agave americana L.）又名龙舌掌、番麻，为龙舌兰科，龙舌兰属多年生常绿大型草本植物，植株高大。叶呈莲座式排列，通常30-40 枚，有时50-60 枚，大型，肉质，倒披针状线形，长1-2 米，中部宽15-20 厘米，基部宽10-12 厘米，叶缘具有疏刺，顶端有1 硬尖刺，刺暗褐色，长1.5-2.5 厘米。圆锥花序大型，长达6-12 米，多分枝；花黄绿色；花被管长约1.2 厘米，花被裂片长2.5-3 厘米；雄蕊长约为花被的2 倍。蒴果长圆形，长约5 厘米。因其叶片坚挺，四季常青，花黄绿色，开花后花序上生成的珠芽极少。原产地一般要几十年后才开花，巨大的花序高可达7 至8 米，是世界上最长的花序，白色或浅黄色的铃状花多达数百朵，极具观赏价值, 是南方城市庭园及绿化带的常见花卉。大部分种类的龙舌兰类植物一生只开1 次花，花后随种子的成熟植株则逐渐枯死，龙舌兰一般会经过很多年积攒养分，然后突然发芽疯长。不过这样会耗尽它全部的能量，爆发后的龙舌兰不久便会枯死。而且一些珍贵品种很难开花，因此在生产中常用分株、扦插、播种的方法进行繁殖。

采用组织培养技术快速繁殖大量优质种苗，有助于解决资源匮乏，为规模化、产业化提供技术支持。

发明内容

本发明是为了克服现有技术的不足，提供一种生长周期短，生长效果好，扩繁快的龙舌兰组培繁殖方法。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

一种龙舌兰离体培养的方法，包括外植体处理、诱导培养、增殖培养和生根培养，选取龙舌兰珠芽作为外植体，对外植体进行洗净灭菌消毒处理后，接种于诱导培养基中培养获得龙舌兰愈伤组织，再将龙舌兰愈伤组织转接至增殖培养基中进行增殖培养，最后将分化出的长1-2cm的丛生芽转接到生根培养基中培养获得生根龙舌兰；主要包括如下步骤：

（1）外植体处理：选取龙舌兰珠芽作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡30-40min，用清水洗净后用体积浓度0.15% VC溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用；

（2）诱导培养：将步骤（1）处理后的龙舌兰珠芽的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养3-4 d，然后光照培养，光照时间12h/d，光照强度500-1000lx，培养温度22-28℃，培养时间20-22d，培养得到龙舌兰愈伤组织；

（3）增殖培养：将步骤（2）中诱导得到的龙舌兰愈伤组织转接到增殖培养基中，光照时间10-12h/d，光照强度3000-3500lx，培养温度22-28℃，培养时间20-25d，分化出芽；

（4）生根培养：将步骤（3） 中分化出的芽长至1-2cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间12h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度22-28℃，培养时间20-30d，得到生根龙舌兰。

以上步骤（2）所述的诱导培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 3.0-4.0 mg/L+IBA 2.0-3.0 mg/L +VC 15 mg/L + VB₂ 15 mg/+琼脂粉3.6 g/L+蔗糖20 g/L。