[发明专利]一种龙舌兰离体培养的方法

权利要求书

1.一种龙舌兰离体培养的方法，其特征在于：包括外植体处理、诱导培养、增殖培养和生根培养，选取龙舌兰珠芽作为外植体，对外植体进行洗净灭菌消毒处理后，接种于诱导培养基中培养获得龙舌兰愈伤组织，再将龙舌兰愈伤组织转接至增殖培养基中进行增殖培养，最后将分化出的长1-2cm的丛生芽转接到生根培养基中培养获得生根龙舌兰；主要包括如下步骤：

（1）外植体处理：选取龙舌兰珠芽作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡30-40min，用清水洗净后用体积浓度0.15% VC溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用；

（2）诱导培养：将步骤（1）处理后的龙舌兰珠芽的茎段接种到诱导培养基中培养，先暗培养3-4 d，然后光照培养，光照时间12h/d，光照强度500-1000lx，培养温度22-28℃，培养时间20-22d，培养得到龙舌兰愈伤组织；

（3）增殖培养：将步骤（2）中诱导得到的龙舌兰愈伤组织转接到增殖培养基中，光照时间10-12h/d，光照强度3000-3500lx，培养温度22-28℃，培养时间20-25d，分化出芽；

（4）生根培养：将步骤（3） 中分化出的芽长至1-2cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间12h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度22-28℃，培养时间20-30d，得到生根龙舌兰。

2.根据权利要求1所述的一种龙舌兰离体培养的方法，其特征在于：步骤（2）所述的诱导培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 3.0-4.0 mg/L+IBA 2.0-3.0 mg/L +VC 15 mg/L+ VB₂ 15 mg/+琼脂粉3.6 g/L+蔗糖20 g/L。

3.根据权利要求1所述的一种龙舌兰离体培养的方法，其特征在于：步骤（3）所述的增殖培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 3.0-5.0 mg/L+NAA 1.5-2.0 mg/L+ZT 0.1-0.5mg/L +琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。

4.根据权利要求1所述的一种龙舌兰离体培养的方法，其特征在于：步骤（4）所述的生根培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 1.5-2.0 mg/L+NAA 0.5-1.0 mg/L+VC 10 mg/L+VB₂ 20 mg +琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。

5.根据权利要求2-4任一所述的一种龙舌兰离体培养的方法，其特征在于：所述的改良LS培养基的配方为：NH₄NO₃ 670 mg/L+KNO₃ 1200mg/L+CaCl₂·2H₂O 250mg/L+MgSO_4.·7H₂O350 mg/L+KH₂PO₄ 220 mg/L+H₃BO₃ 8.8mg/L+MnSO_4.·4H₂O 22.3 mg/L+ZnSO₄·4H₂O 8.6 mg/L+KI0.56mg/L+Na₂MoO₄·H₂O 0.25 mg/L+CuSO_4.·5H₂O 0.025 mg/L+CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L+FeSO₄ 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 75 mg/L+烟酸 0.5 mg/L+盐酸吡哆醇0.5 mg/L+甘氨酸 2 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L。