[发明专利]一种三维肿瘤模型脱细胞多孔支架、构建方法及其应用

权利要求书

1.一种三维肿瘤模型脱细胞多孔支架的构建方法，其特征在于以下步骤：

(1)将整个猪肺组织置于-20～-30℃冰箱冷冻3～12h，待其固定成型后，选取肉眼观察无明显支气管的区域切块；

(2)室温下，将步骤(1)中得到的切块采用纯净水清洗后，采用磷酸盐缓冲液清洗，去除切块中的血丝；

(3)室温下，在步骤(2)中得到的切块放置于质量分数为0.1～1％的十二烷基磺酸钠水溶液中，磁力搅拌12～18h后，初步脱除细胞，得到部分脱除细胞的切块；

(4)室温下，在步骤(3)得到切块放置于体积分数为0.1～0.5％的TritonX-100溶液中，磁力搅拌8～15h，继续脱除细胞；

(5)室温下，将步骤(4)得到的切块采用磷酸盐缓冲液清洗，得到脱细胞切块；

(6)将步骤(5)得到的脱细胞切块置于-20～-30℃预冻5～12h；

(7)将步骤(6)预冻后切块冷冻干燥，得到多孔脱细胞猪肺支架；所述的冷冻干燥的冷阱温度为-45～-55℃，冷冻干燥时间为12～24h；

(8)切片切除步骤(7)得到的支架表面致密层后，室温条件下，将支架浸于交联剂中化学交联12～24h后，采用磷酸盐缓冲液清洗后，在-45～-55℃条件下对其进行冷冻干燥12～24h，获得交联的、结构稳定的脱细胞猪肺基质；所述的交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺、乙磺酸的60～70％乙醇溶液的混合溶液，其中，乙磺酸作为缓冲液；

所述的交联剂中1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的浓度均为10～50mmol/L；乙磺酸的浓度为20～50mmol/L。

2.根据权利要求1所述的一种三维肿瘤模型脱细胞多孔支架的构建方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液的pH为7.4。

3.根据权利要求1或2所述的一种三维肿瘤模型脱细胞多孔支架的构建方法，其特征在于，步骤(5)中磷酸盐缓冲液清洗切块3～5次，每次清洗持续时间0.5～1h。

4.根据权利要求1或2所述的一种三维肿瘤模型脱细胞多孔支架的构建方法，其特征在于，步骤(8)中交联后磷酸盐缓冲液清洗次数为2～4次，每次清洗时间1h。

5.根据权利要求3所述的一种三维肿瘤模型脱细胞多孔支架的构建方法，其特征在于，步骤(8)中交联后磷酸盐缓冲液清洗次数为2～4次，每次清洗时间1h。

6.采用权利要求1-5任一所述的构建方法得到的三维肿瘤模型脱细胞多孔支架，其特征在于，所述的三维肿瘤模型脱细胞多孔支架能够保留猪肺特有的肺泡及少量小支气管多孔结构，孔隙率在88.14％～94.09％范围之间，吸水率在181.6％～280.55％之间，孔径在115μm～222μm之间，支架应力在242.24～634.23kPa之间。

7.一种如权利要求6所述的三维肿瘤模型脱细胞多孔支架在体外3D肿瘤模型中的应用，用于抗肿瘤药物的筛选研究。