[发明专利]一种检测肌红蛋白免疫荧光定量试纸条

说明书

技术领域

本发明免疫学检测领域，更具体地涉及一种检测肌红蛋白免疫荧光定量试纸条。

背景技术

肌红蛋白(myoglobin，MYO)是骨骼肌和心肌特异性氧结合蛋白，分子量为17.8kD，由于分子量较小，主要分布于心肌和骨骼肌组织约占肌肉总量的0.1％～0.2％。当心肌或骨骼肌损伤时，MB会从肌肉组织释放到循环血中，并且能经肾小球滤过，出现在尿中。因此血液和尿中MB测定可用于某些肌病和心脏病的诊断，如急性心肌梗死(AMI)、急性肌损伤、急慢性肾衰竭、严重充血性心力衰竭、长时间休克、肌营养不良、肌萎缩和多发性肌炎等疾病。测定血清肌红蛋白肌红蛋白可作为急性心肌梗死(AMI)诊断的早期最灵敏的指标。但特异性差,骨骼肌损伤、创伤、肾功能衰竭等疾病,都可导致其升高。MYO阳性虽不能确诊AMI,但可用于早期排除AMI诊断的重要指标,如MYO阴性,则基本排除心肌梗死,还可用于再梗死的诊断,结合临床,如Myo重新升高,应考虑为再梗死或者梗死延展。

目前肌红蛋白的检测方法主要有酶联荧光分析法、放射免疫法、酶联免疫吸附法、化学发光等。放射免疫法有放射性物质，会造成放射性污染；酶联免疫法测定周期长，不适合急诊的快速检测，对操作人员有较高的专业要求；化学发光成本较高，且检测所需仪器较为昂贵。

荧光免疫层析定量检测技术是免疫层析技术和荧光标记技术的结合，其具有检测仪器精巧轻便、操作简单迅速、结果精准等优点，被广泛应用于多类抗原物质的检测。其中，抗体-荧光微球偶联物实施荧光免疫层析定量检测的关键分子之一，其稳定性关乎抗原荧光定量检测的准确度及其产品的保存期。因此，对抗体-荧光微球偶联物的储存液的要求很高。因此寻找一种助稳性能更好、能提高检测准确度、层析回收率高的储存液对检测肌红蛋白非常具有现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测肌红蛋白免疫荧光定量试纸条。

本发明所采取的技术方案是：

一种检测肌红蛋白免疫荧光定量试纸条，包括吸水垫、硝酸纤维素膜、质控线、检测线、结合垫、样品垫、PVC底板；其中，结合垫上喷有鼠源肌红蛋白单克隆抗体-荧光微球偶联物；检测线为鼠源肌红蛋白单克隆抗体，质控线为羊抗鼠IgG多克隆抗体，且检测线和质控线依次固定于硝酸纤维素膜上；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次搭接并承载于PVC底板；鼠源肌红蛋白单克隆抗体-荧光微球偶联物使用储存液进行浸渍处理、保存和稀释；所述的储存液配方为：PB的质量浓度为15～50mM、BSA的百分浓度为1.6％～10％、Tween-80的百分浓度为0.4％～10％、葡萄糖的百分浓度为0.4％～10％、甘氨酸的百分浓度为1.5％～10％、PEG4000的百分浓度为0.8％～5％、PEG20000的百分浓度为1％～8％、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.01％～1.5％，余量为水，pH为6.5～9.0。

进一步的，所述的储存液配方为：PB的质量浓度为20～40mM、BSA的百分浓度为0.5％～4.8％、Tween-80的百分浓度为0.5～6.0％、葡萄糖的百分浓度为0.5～3.0％、甘氨酸的百分浓度为2.0～7.0％、PEG4000的百分浓度为1.0～3.0％、PEG20000的百分浓度为1.5～4.0％、Proclin300或叠氮钠的百分浓度为0.03～0.1％，余量为水，pH为7.0～8.0。

上述所述试纸条的检测方法，将该试纸条加样层析后，检测质控线和检测线的荧光信号强度，并以质控线荧光信号强度校正检测线的荧光信号强度，实现肌红蛋白的定量检测。

一种检测肌红蛋白免疫荧光定量试纸条的制备方法，包括如下步骤：

将荧光微球活化后与鼠源肌红蛋白单克隆抗体偶联，偶联完毕后加入封闭剂，保存于储存液中；

将鼠源肌红蛋白-荧光微球偶联物用储存液稀释后，喷于结合垫上，干燥保存；

将鼠源肌红蛋白单克隆抗体固定于硝酸纤维素膜上作为检测线，将羊抗鼠IgG多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜上作为质控线；

在PVC底板上依次搭接地粘贴：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，并剪切成适当宽度即成为荧光免疫层析试纸条，其中，样品垫材质为玻璃纤维素膜或滤血膜，结合垫材质为玻璃纤维素膜；