[发明专利]一种检测HER3突变的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种检测HER3突变的试剂盒及其检测方法。

背景技术

人类表皮生长因子受体(Human epidermal-growth-factor receptor，HER)家族包括EGFR(erbB1/HER1)、HER2、(erbB2/neu)、HER3(erbB3)和HER4(erbB4)四个家族成员，属于I型受体酪氨酸激酶家族(Receptor tyrosine kinase,RTKs)。HER与配体结合后激活，形成同型二聚体或异型二聚体，调节MAPK通路或激活PI3K/AKT通路参与细胞的信号传递，在细胞内通过激酶级联传递信号，最终调节细胞的生长及分裂，并参与肿瘤细胞的增殖、浸润及血管生成等。HER家族蛋白与乳腺癌、肺癌及黑色素瘤等众多肿瘤的临床病理特征及预后密切相关。

HER3又称erbB3，其mRNA为6.2Kb糖基化的蛋白，分子量为160kd，含1342个氨基酸残基。HER3激酶调控区包含6个能与磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide3-kinase,PI3K)的亚单位P85结合的位点，所以HER3成为PI3K及蛋白激酶B信号转导通路的主要激活因子，从而调控肿瘤细胞生长、凋亡、浸润、转移等过程。有研究显示HER3在各种肿瘤组织中存在过表达，其过表达可能系转录(mRNA)或转录后水平(蛋白合成)的上调引起，在临床肿瘤中发挥生物学作用的是受体蛋白。除造血组织外的正常组织细胞均有HER3蛋白的表达，表明HER3在正常细胞分化增殖中起着不可忽视的生理作用。

据报道，在结肠癌和胃癌中有11％发生HER3突变，在胆囊癌中有11.8％发生HER3突变，非小细胞肺癌、卵巢癌和脑胶质瘤也有不同比例的HER3突变。HER3基因突变改变了细胞上皮的非配体依赖方式，影响了细胞正常的分化和增殖，从而导致癌变。体内实验显示抗体类和小分子抑制剂可以有效抑制突变HER3调节的致癌作用和癌症的进程。虽然目前尚无针对HER3靶点的药物上市，但越来越多的公司和机构参与HER3药物的研发，有些已进入临床阶段。而检测HER3突变是指导HER3靶向药物使用的前提和基础。

目前，HER3突变的检测方法主要为直接测序法，测序法从样本准备到测序结果解读，效率低，耗时长，需2天左右时间；且直接测序法检测灵敏度低，对于突变率较低的情况，直接测序的方法几乎难以实现其准确检测，会导致大量的漏检和假阴性的发生。因此，直接测序等技术远不能达到其实际应用的需求。

因此，研发高效灵敏的检测试剂盒及方法检测HER3突变对于提高患者的生存率，延长生存期，避免过度化疗，提高生存质量有着重大意义。

发明内容

针对现有技术的不足及实际的需求，本发明提供一种检测HER3突变的试剂盒及其检测方法，所述试剂盒能够实现简便、快速检测HER3基因突变，所述试剂盒采用焦磷酸测序的方法，所述焦磷酸测序的方法具有特异性好，检测方法简便快速，能够给出具体突变比例等优点，利用焦磷酸测序技术检测肿瘤样本HER3基因突变的产品在技术上具备竞争优势。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

一方面，本发明提供一种检测HER3突变的试剂盒；

所述试剂盒包括扩增引物和测序引物，所述扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.18所示，所述测序引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.19-27所示；

所述扩增引物的核苷酸序列具体如下：

SEQ ID NO.1:TATGTCCTCGTGGCCATGAAT；

SEQ ID NO.2:AACATGACGAAGATGGCAAACT；

SEQ ID NO.3:AGACCATCTGTGCTCCTCAGTG；

SEQ ID NO.4:GCCACATCCCAATTTCAGAAC；

SEQ ID NO.5:TTGGGATGTGGCCTTTGA；

SEQ ID NO.6:ACTGATACTTGGTGTGGGGATTG；

SEQ ID NO.7:AACCCAATCCCCACACCAAG；

SEQ ID NO.8:ATCATTGTTCCTTCCCCTCAGAC；

SEQ ID NO.9:GTGGACTCGAGCAACATTGATG；

SEQ ID NO.10:GCTGGGGTCTAAGGAGGGAAG；

SEQ ID NO.11:CAAGATCCCTGCCCTGGAC；