[发明专利]一种检测HER3突变的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种检测HER3突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括扩增引物和测序引物，所述扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.18所示，所述测序引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.19-SEQ ID NO.27所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括甘油和/或甜菜碱，优选为甘油和甜菜碱的组合；

优选地，所述甘油的质量分数为2％-4％，优选为3％；

优选地，所述甜菜碱的摩尔浓度为0.25M-0.5M，优选为0.4M；

优选地，所述试剂盒还包括焦磷酸测序的常规试剂；

优选地，所述常规试剂包括：琼脂糖凝胶珠、吸附缓冲液、退火缓冲液、测序酶、测序底物、10×洗液、变性液、dATPаS、dCTP、dGTP或dTTP中的任意一种或至少两种的组合。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括扩增引物、测序引物、甘油、甜菜碱和焦磷酸测序的常规试剂；

所述扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.18所示，所述测序引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.19-SEQ ID NO.27所示；

所述甘油的质量分数为2％-4％，所述甜菜碱的摩尔浓度为0.25M-0.5M；

所述常规试剂包括：琼脂糖凝胶珠、吸附缓冲液、退火缓冲液、测序酶、测序底物、10×洗液、变性液、dATPaS、dCTP、dGTP或dTTP中的任意一种或至少两种的组合。

4.一种应用如权利要求1-3中任一项所述的试剂盒检测HER3突变的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取肿瘤组织样本基因组DNA；

(2)对基因组DNA的HER3基因的9个位点进行PCR扩增；

(3)对PCR产物进行焦磷酸测序，检测9个位点的突变。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR扩增的9个位点包括104位点、232位点、262位点、284位点、355位点、389位点、809位点、846位点和928位点。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR扩增的引物包括：

所述104位点扩增使用的PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

所述232位点扩增使用的PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

所述262位点扩增使用的PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示；

所述284位点扩增使用的PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示；

所述355位点扩增使用的PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；

所述389位点扩增使用的PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示；

所述809位点扩增使用的PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示；

所述846位点扩增使用的PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示；

所述928位点扩增使用的PCR引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示；

优选地，步骤(2)所述PCR扩增的PCR引物的终浓度为0.1-0.3μM，优选为0.2μM。

7.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述扩增反应的程序具体如下：

(1’)在98℃下进行预热3分钟；

(2’)在98℃下保持10秒进行变性，65℃下保持30秒进行退火，72℃下保持20秒进行扩增和延伸，循环该过程45次；

(3’)进行熔解曲线。